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分類	共搜索到 293 個相關話題(最多顯示前5000個)	作者	最后發(fā)表

生物科學	雙酶切實驗前的基本知識與原理解析常用的限制性內(nèi)切酶種類及特點寶子們，市面上限制酶種類超多，但常用的有這些類型：1??粘性末端酶：切割后產(chǎn)生單鏈突出的末端，如EcoRI(G↓AATTC)、BamHI(G↓GATCC)、HindIII(A↓AGCTT)。...	畢合生物2024	2026-03-04 10:26
分子生物	質(zhì)粒載體多克隆位點還允許使用兩種不同的限制酶（例如EcoRI和BamHI）對其進行切割，然后克隆一個具有一個EcoRI末端和一個BamHI末端的DNA片段。這稱為定向克隆，因為插入的DNA只能以一個方向放入載體...	YX科研小助理	2024-05-31 08:01
動植物	干貨分享\|質(zhì)粒載體多克隆位點還允許使用兩種不同的限制酶（例如EcoRI和BamHI）對其進行切割，然后克隆一個具有一個EcoRI末端和一個BamHI末端的DNA片段。這稱為定向克隆，因為插入的DNA只能以一個方向放入載體...	超困困狗g	2024-05-13 12:51
分子生物	干貨分享\|質(zhì)粒載體多克隆位點還允許使用兩種不同的限制酶（例如EcoRI和BamHI）對其進行切割，然后克隆一個具有一個EcoRI末端和一個BamHI末端的DNA片段。這稱為定向克隆，因為插入的DNA只能以一個方向放入載體...	醫(yī)學驗證123	2024-04-01 07:19
微生物	利用整合型質(zhì)粒做同源重組的問題我要做枯草芽孢桿菌芽孢展示，amyE是枯草芽孢桿菌...利用amyE臂作同源重組，我想在amyE上下游之間插入目的基因（Ecori，HindIII酶切位點），但是amyE下游在5‘，amyE上游在3’？沒關系的嗎？	ningdeyu	2024-02-02 07:05
分子生物	雙酶切求助！雙酶切后載體條帶很淺實驗內(nèi)容是載體和插入片段同時酶切過夜，用的EcoRI和BamHI，片段和載體都是50體系，且都加了500ng,試過把載體加到1000ng，跑出來的條帶是插入片段是亮的，載體條帶很淺...	C12ire1	2023-05-11 12:33
生物科學	pPIC9K和目的基因構(gòu)建我把我的目的基因插入到pPIC9K的EcoRI和NotI之間，請問分泌表達時，信號肽切割完成后，目的基因前面的氨基酸怎么弄，還有就是，終止子前面還有好多無關氨基酸，都是怎么去除的希望各位...	231584	2022-08-02 09:44
微生物	質(zhì)粒提取及原理這些你都知道嗎堿法抽提得到質(zhì)粒樣品中不含線性DNA，可以采用EcoRI來線性化質(zhì)粒后再進行瓊脂糖電泳，就會看到線性質(zhì)粒DNA的位置與這三條帶的位置不一樣。其實這三條帶以電泳速度的快慢而排序，分別是超...	北京艾柏森	2021-11-08 01:27
分子生物	求助：請問構(gòu)建這個質(zhì)粒時選擇了EcoRI和BamHI位點，設計引物時... 載體為：PBV220,酶切位點為EcoRI和BamHI（上游、下游），請問插入目的基因片段時如何看是否發(fā)生移碼？萬分感謝！質(zhì)粒序列為：1...	晴木川	2021-10-15 09:26
碩博家園	載體哪些載體是T7啟動子，氨芐抗性，3000左右呢，含有BamHI和EcoRI	圓圈愛圈圓	2021-08-12 02:08
碩博家園	酶切切不開我用EcoRI和ClaI酶切我的1301載體，無論是單酶切還是雙酶切都是只能切開單鏈，而不能切陳想要的片段大小，兩個酶切位點之間大約5500bp。各位大神幫忙看看是怎么回事	閑人清風	2020-11-17 02:19
分子生物	酶切的時候兩個內(nèi)切酶可以一起嗎可以和連接載體一起嗎我用的是EcoRI-HF和BAMHI-HF第一次做不知道怎么做。后面連接載體用的是1304用T4連接酶可以嗎體系啥的我都不知道哭了	AmaliaWong	2020-05-19 10:46
碩博家園	求助前輩，為什么我的目的基因構(gòu)建在pET28a上換了酶切位點，不... 剛接觸原核表達不大了解質(zhì)粒，剛開始先在pET28a選擇酶切位點BamHI和EcoRI插入目的基因了（質(zhì)粒圖譜如下），轉(zhuǎn)化BL21（DE3）有大量表達，但是后來發(fā)現(xiàn)目的蛋白前有34個非目的蛋白的氨基酸...	檢驗小生	2019-11-03 04:56
微生物	老師，麻煩您了，想問問為什么我的目的基因構(gòu)建在pET28a上換了酶... 老師，麻煩您了，想咨詢一下目前實驗的問題剛接觸原核表達不大了解質(zhì)粒，剛開始先在pet28a選擇酶切位點bamhi和ecori插入目的基因了（質(zhì)粒圖譜如下），轉(zhuǎn)化bl21（de3）有大量表達，但是后來...	檢驗小生	2019-11-03 04:49
分子生物	大腸桿菌pet28a載體上限制性內(nèi)切酶位點的選擇蟲友們好，我想利用大腸桿菌BL21（DE3）作為宿主，利用pET28a作為載體...已知目的基因上有EcoRI和SphI兩個限制性酶切位點，不知道應該怎樣選擇限制性酶切位點才能啟動強表達該目的蛋白。謝謝！	bio-boy	2019-07-21 01:26
分子生物	克隆連接后無果～求賜教… EcoRI和BglII雙酶切…大片段載體大概10kb，插入片段200bp左右，T4連接一直無果，16度過夜后放4度半天，平板有些許克隆，但都不是重組產(chǎn)物，目測大部分都是載體片段………求大牛賜教該腫么破...	skynet999	2019-06-17 09:41
微生物	關于pet28a雙酶切有用HindIII與EcoRI雙酶切pet28a質(zhì)粒的嘛？我用NEB快切酶，35切2h，跑電泳只能看到一條5000多的條帶，不知道能不能切好埃目前做連接老是連接不上，所以考慮是不是載體沒切好。	wangpei2433	2019-02-19 01:36
碩博家園	質(zhì)粒構(gòu)建構(gòu)建了一個質(zhì)粒，載體6535bp，目的基因1000bp，菌落pcr驗證正確，但是用相應酶切位點speI和BamHI雙酶切切不開，在用其他的EcoRI和HindIII切開了，本來應該是3400+4000的，但是確是6500+1000...	青檸檬PCR	2018-11-01 01:05
分子生物	原核表達求解答：我做的鱉的抗菌肽蛋白原核表達，我先用PMD-18T載體和我的基因成熟肽連接，然后把PMD-18T-成熟肽的重組質(zhì)粒和PET-his質(zhì)粒（Amp抗性）分別同時雙酶切（HindIII和EcoRI），分別膠回收...	月下影相隨	2018-10-07 01:48
分子生物	初學pcr，對下游引物的設計不太明白？請問一下下游引物的酶切位點應該怎么寫？需要互補嗎？比如保護堿基是G，EcoRI是GAATTC，引物是那上游引物應該是5'GGGTACC3'下游引物應該怎么寫呢	慧唱歌的豬豬	2018-09-21 11:34
碩博家園	轉(zhuǎn)化DH5a出現(xiàn)很多假陽性本人在做克隆表達，載體是pET28a，目的基因是從基因組PCR獲得的產(chǎn)物，上面有EcorI和HindⅢ酶切位點，分別加了一個保護堿基和兩個保護堿基，所購買的限制酶是快切酶，PCR產(chǎn)物在37℃酶切5min...	Cherishqj	2018-08-29 01:56
分子生物	酶切表達載體我用EcoRI和BamHI酶切PYES2表達載體4h，電泳驗證不知道為什么表達載體老是出現(xiàn)兩條帶，求大神解答	小花貓01	2018-07-09 07:19
碩博家園	單酶切出問題求幫忙我用EcoRI酶進行單酶切，確定在片段上沒有酶切位點，酶切三小時，目前出現(xiàn)多條帶，原因是啥，求幫助，體系：酶：1微升，質(zhì)粒：1微升	xinnnsy	2018-05-03 12:30
分子生物	雙酶切構(gòu)建pGADT7載體出問題？求助酶切體系50ul（用的全式金的EcoRI和BamHI)酶切目的條帶時：PCR膠回收產(chǎn)物和連測序載體的都酶切了）DNA5ulBuffer5ulEcoRI1ulBamHI1ulddH2O38ul37℃反應2小時連接體系10ul(諾維贊的T4連接酶）...	18754802930	2018-04-16 03:07
生物科學	ppic9k和目的基因構(gòu)建我把我的目的基因插入到pPIC9K的EcoRI和NotI之間，請問分泌表達時，信號肽切割完成后，目的基因前面的氨基酸怎么弄，還有就是，終止子前面還有好多無關氨基酸，都是怎么去除的希望各位...	墨跡太深	2018-03-19 03:30

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