 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3415 | 回復(fù): 20 | |||
[求助]
TA克隆連接方向問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)室小白，求大神們指教！ 已有4人參與
|
|||
|
TA連接方向問(wèn)題。我用pMD19T simple 和帶有BamH1和Hind3的PCR產(chǎn)物鏈接，怎么驗(yàn)證它的連接方向呢？ 我接下來(lái)要連接到pET-32a 上表達(dá)，已經(jīng)確定用這兩個(gè)酶切位點(diǎn)可以正向連在pET-32a上了，還需要驗(yàn)證PCR產(chǎn)物在克隆載體上的方向嗎？ @youlinglyw 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有160人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
14樓2017-06-10 07:15:07
MulanQahar
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 648
- 散金: 227
- 紅花: 9
- 帖子: 319
- 在線: 93.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 6099469
- 注冊(cè): 2017-03-22
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞生長(zhǎng)與分裂
|
第一種方法，Sequencing. 第二種是，找一個(gè)離bamh 1 或 離hind3 近的digestion site. 然后用雙酶切 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2017-06-09 10:03:36
MulanQahar
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 648
- 散金: 227
- 紅花: 9
- 帖子: 319
- 在線: 93.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 6099469
- 注冊(cè): 2017-03-22
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞生長(zhǎng)與分裂
|
用雙酶切的時(shí)候，一般不會(huì)有這種情況。但是常常有很多的意外發(fā)生。比如mutation. 還有就是，你的pcr 產(chǎn)物或許有問(wèn)題的情況也都有。因?yàn)閜cr的時(shí)候，能讀的長(zhǎng)度是有限的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
9樓2017-06-09 10:38:47
淵博震天
版主 (職業(yè)作家)
Yeast Display
- MolEPI: 7
- 應(yīng)助: 212 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.043
- 金幣: 22006.2
- 散金: 257
- 紅花: 55
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 4581
- 在線: 688.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2380836
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
- 管轄: 分子生物
|
我怎么確定這個(gè)方向呢？酶切位點(diǎn)在設(shè)計(jì)的時(shí)候就要注意其是否在5'還是3'端嗎？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
18樓2017-06-10 12:06:35
2樓2017-06-09 09:53:54
3樓2017-06-09 09:54:27
送紅花一朵 |
Simple 載體上沒(méi)有酶切位點(diǎn)的～測(cè)序的話也想過(guò)，不過(guò)需要花錢，如果實(shí)在是沒(méi)辦法也就只能測(cè)序了～ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2017-06-09 10:08:26
|
還有一點(diǎn)不明白，為什么要驗(yàn)證方向呢？切下來(lái)后不連在表達(dá)載體上一樣嗎？我的理論基礎(chǔ)有些差，還請(qǐng)多指教。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
6樓2017-06-09 10:10:55
MulanQahar
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 648
- 散金: 227
- 紅花: 9
- 帖子: 319
- 在線: 93.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 6099469
- 注冊(cè): 2017-03-22
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞生長(zhǎng)與分裂
7樓2017-06-09 10:27:10
|
PCR產(chǎn)物上有酶切位點(diǎn)，BamH1和Hind3。但是載體上沒(méi)有其他的酶切位點(diǎn)了，也就是說(shuō)連完后的重組DNA上就只有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
8樓2017-06-09 10:34:44
MulanQahar
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 648
- 散金: 227
- 紅花: 9
- 帖子: 319
- 在線: 93.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 6099469
- 注冊(cè): 2017-03-22
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞生長(zhǎng)與分裂
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
不要找載體上的切點(diǎn)。找pcr產(chǎn)物上的切點(diǎn)。除了那兩個(gè)。知道你的pcr產(chǎn)物的sequence嗎？用NEB cutter 可以找到酶切點(diǎn) 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
10樓2017-06-09 10:45:18
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 linhanmm 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +6 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +7 | 元夕元 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4 | Higraduate 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +6 | 田洪有 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +9 | Micky11223 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +7 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚(yú) 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩找調(diào)劑 +5 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 研研，接電話 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 085404電子信息284分求調(diào)劑
+4
|
13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300) +5 | 番茄頭--- 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿國(guó)科過(guò)程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境，總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +4 | LHHL66 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 269專碩求調(diào)劑 +6 | 金恩貝 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩301分求調(diào)劑 +7 | Liyouyumairs 2026-03-21 | 7/350 |
|