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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 酵母轉化
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[交流]
酵母轉化
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做了一兩個月了，酵母轉化一直不成功，請做過相關實驗的小伙伴給點建議�。。� 我的載體是pPICZaA，酵母菌株是GS115，用SacI酶切質粒線性化，用的10x 的體系（質粒共10ug），酶切后純化得到質粒，再轉化到GS115中，可是問題是酶切后的質粒濃度很低，還不到100ng/ul，轉化要求加入5-10ug 質粒！哪位朋友可以給點意見，非常感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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送紅花一朵 |
謝謝這么晚了回帖！我載體引物和特異性引物都用了，理論上來說，pcr有條帶就差不多是正確的，可是提質粒，用質粒測序失敗，所以很糾結到底有沒有轉進去。今天挑了100多個菌落重新pcr，同樣還是有目的條帶的，打算拿pcr產物去測序，看結果怎樣？我們實驗室成功做了酵母單雜了，方法原理其實都差不多吧，但是卡在這一步真的很無奈，，， 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2017-04-18 00:39:15
2樓2017-04-16 23:34:02
choujiaoqi
鐵桿木蟲 (知名作家)
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-05-07 22:23:01
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-05-07 22:23:01
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可以考慮換個菌種，有的菌種跟轉進去的質粒不兼容，導致一個細胞內質�？截悢�(shù)少。還有是不是質粒太大，轉進去難度大 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2017-04-17 00:20:50
張凡云
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4樓2017-04-17 07:27:43
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