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關(guān)Q想畢業(yè)新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
pMD19-T載體連接,怎么都連接不上是怎么回事?求大神 已有6人參與
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我的目的片段36Kb左右,用的酶是TaKaRa的PreMix Taq,連接體系是1μl19-T,1.5μl回收產(chǎn)物,2.5μl水,5μlSolution Ⅰ,16°C,30分鐘,轉(zhuǎn)入DH5α感受態(tài),然后用氨芐板篩,然后做菌液pcr。 同一株困用19-T的通用引物P一遍,用我自己目的基因的特異引物P一遍,我挑了50個(gè)菌落,什么都沒(méi)有P出來(lái),不管是T載體的還是我自己目的基因的,都沒(méi)有P出來(lái),請(qǐng)問(wèn)大神們是哪里出了問(wèn)題? 還有一個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教,我看這個(gè)19-T載體的說(shuō)明書(shū)說(shuō)什么藍(lán)白菌落的,我怎么沒(méi)有遇到,還有和19-T載體裝在一起的那個(gè)Control Insert是什么,我的體系里沒(méi)有正常嗎? @youlinglyw 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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銅蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (小有名氣)
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目的片段會(huì)不會(huì)太大了,PMD19-T也就是2600多,我一般加4μl回收產(chǎn)物產(chǎn)物,連三個(gè)小時(shí),你可試試過(guò)夜。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
新蟲(chóng) (小有名氣)
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感謝回復(fù),我忘了說(shuō)一點(diǎn),我用氨芐板篩的,每次都長(zhǎng)出很多,但是菌液pcr卻P不出T載體的帶,這是怎么回事? 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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