 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2789 | 回復: 10 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
RCA滾環(huán)擴增中用到的酶的問題 已有1人參與
|
||
| 我看到都是用phi29這種酶來做滾還擴增，用KF聚合酶可以做嗎，以及這兩種酶之間有什么區(qū)別？有做過的前輩可以分享一下嗎。 |
回復此樓» 猜你喜歡
293求調劑
已經有14人回復
-
0703化學336分求調劑
已經有6人回復
-
304求調劑
已經有9人回復
-
281求調劑（0805）
已經有8人回復
-
環(huán)境領域全國重點實驗室招收博士1-2名
已經有3人回復
-
材料專碩306英一數二
已經有10人回復
-
301求調劑
已經有6人回復
-
一志愿天津大學化學工藝專業(yè)（081702）315分求調劑
已經有7人回復
-
302求調劑
已經有6人回復
-
26博士申請
已經有3人回復
10樓2023-10-06 10:45:15
Tiriosh
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- 應助: 84 (初中生)
- 金幣: 20347.3
- 散金: 3123
- 紅花: 66
- 帖子: 3674
- 在線: 5881.7小時
- 蟲號: 2417244
- 注冊: 2013-04-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數 +1
|
除了一般的DNA聚合外，RCA最大的特點是需要聚合酶持續(xù)的把之前生成的雙開“頂開”，也就是說需要具有strand displacement性能。根據NEB官網信息，KF是Moderate strand displacement activity，感覺應該可以做RCA但是可能效率會有影響。與之相對，phi29是strong strand displacement activity。 做RCA用的酶，除了strand displacement性能之外還會考慮exonuclease activity性能，是否具備這一性能對于RCA的實驗細節(jié)有影響。KF不具備外切酶活性（以NEB官網說明為準，來源不同話可能性能有所不同）那么對primer的處理就需要保證其3'端是結核在circular tempalte上，通常的做法是用外切酶trim一下，這也要看你的實驗設計咯。 此外，phi29的一個很大的問題是其最適溫度是30°，所以反應速度會慢一些。如果你是處于提高反應溫度考慮而換酶的話，推薦你使用EquiPhi29，是phi29的熱穩(wěn)定版。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
炸魚條yy2樓2019-10-08 20:48:04
SX花開有聲
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 56.8
- 帖子: 26
- 在線: 8.9小時
- 蟲號: 7734388
- 注冊: 2018-01-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
3樓2019-10-09 09:08:34
Tiriosh
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- 應助: 84 (初中生)
- 金幣: 20347.3
- 散金: 3123
- 紅花: 66
- 帖子: 3674
- 在線: 5881.7小時
- 蟲號: 2417244
- 注冊: 2013-04-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
4樓2019-10-09 14:53:14
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調劑 +5 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調劑 +7 | 好運連綿不絕 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 國自科面上基金字體 +6 | iwuli 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[教師之家] 焦慮 +7 | 水冰月月野兔 2026-03-13 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請]
有必要更換申報口嗎
 20+3
|
fannyamoy 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學調劑 +4 | 快樂的香蕉 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學方向，295求調劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703，333分求調劑 一志愿鄭州大學-物理化學 +3 | 李魔女斗篷 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +6 | Mochaaaa 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調劑 +3 | 球球古力 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調劑 +5 | 超級伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調劑 +3 | 小匕仔汁 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調劑 +3 | 李政瑩 2026-03-12 | 3/150 |
|