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xiao杉兒金蟲 (小有名氣)
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[求助]
肝微粒體實驗中代謝穩(wěn)定性問題 已有3人參與
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懇請各位大神幫幫忙!! 本人現(xiàn)在在做一個單一成分的肝微粒體體外代謝實驗 情況一:孵育時間考察中,發(fā)現(xiàn)其代謝穩(wěn)定性很亂,用大鼠肝微粒體做,底物濃度(20uM),蛋白濃度0.5 mg/ml,設0-120min的孵育時間,最終有時能降20~30%,有時又只有百分之幾的變化,且中間有的點不降反增。 情況二:選了某次穩(wěn)定性實驗中代謝了15%的時間點(30min),蛋白濃度(0.75mg/ml,已考察)做底物濃度的考察,發(fā)現(xiàn)中間仍有某些點沒有規(guī)律性的變化,但各濃度點有代謝30~40%,排除這些點后總體的代謝速率在上升,且呈線性。 情況三:選用上述在線性范圍內(nèi)的某底物濃度(60uM),再次用大鼠肝微粒體做代謝穩(wěn)定性實驗,發(fā)現(xiàn)代謝依然不穩(wěn)定,重做,在60min時也只有百分之幾的代謝。 現(xiàn)在實驗一直停滯不前了,按篩選出的條件做得不到前面實驗的結(jié)果(如與孵育時間和底物濃度實驗代謝情況比 ),請各位大神不吝賜教,謝謝。。。 |
金蟲 (小有名氣)
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