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adjoq新蟲 (初入文壇)
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[求助]
DNA能跑出但PCR卻什么都沒(méi)有 已有2人參與
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我們做植物的DNA提取，跑出來(lái)的帶大都是好的，但為什么PCR卻一條帶都沒(méi)有，只有少許隱約的痕跡，能確定程序和試劑沒(méi)問(wèn)題，不知道什么原因，已經(jīng)試了很多遍了，還是什么都沒(méi)有。導(dǎo)師說(shuō)這是運(yùn)氣問(wèn)題，但我不相信，你們能告訴我在提取DNA和PCR需要注意些什么嗎?造成這種結(jié)果是什么原因？謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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初入江湖豬豬
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拖帶顯示出來(lái)你提的DNA不純，也就是說(shuō)你在提取過(guò)程中有很多問(wèn)題沒(méi)有注意，比如洗脫DNA的時(shí)候，比如研磨材料的時(shí)候，比如加加有機(jī)溶劑的量等等 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
12樓2017-07-17 23:46:08
chunlongyang
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-07-17 07:39:29
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模板量減少，50ul體系加小于100ngDNA。另外，你的DNA中RNA量太多了，加RNA酶處理一下。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-07-16 23:44:04
傷何處
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-07-17 07:39:41
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-07-17 07:39:41
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同意樓上說(shuō)的。你的DNA含有RNA太多，需要加RNA酶處理，去除RNA，然后再測(cè)下DNA濃度。因?yàn)橛蠷NA的存在，你之前測(cè)得DNA濃度會(huì)偏高好多。一般50微升體系DNA50-100ng就夠了。 還有就是你用DNA是為了擴(kuò)啟動(dòng)子？ 如果基因組測(cè)序了，那么根據(jù)基因組設(shè)計(jì)的引物一般都沒(méi)問(wèn)題。但是如果是根據(jù)相似種的基因組設(shè)計(jì)引物的話，往往會(huì)擴(kuò)增不出來(lái)，因?yàn)閱?dòng)子不像CDS那樣保守，所以這時(shí)候確實(shí)是比較碰運(yùn)氣的。 祝好 |
3樓2017-07-17 00:21:35
adjoq
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4樓2017-07-17 08:42:28
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