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米夏girl銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
對(duì)基因片段測(cè)序結(jié)果表示不解，求大神指導(dǎo) 已有1人參與
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我對(duì)炭疽屬真菌的CHS（編號(hào)D）、TUB2（編號(hào)E）、CAL（編號(hào)F）三個(gè)基因片段分別進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，并送公司測(cè)序。但是對(duì)測(cè)序結(jié)果表示很不理解，問題如圖中標(biāo)注： http://![\"對(duì)基因片段測(cè)序結(jié)果表示不解](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2017/0814/bw140h2214233_1502700498_888.jpg#opennewwindow\") http://![\"對(duì)基因片段測(cè)序結(jié)果表示不解，求大神指導(dǎo)-1\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2017/0814/bw140h2214233_1502700549_451.jpg#opennewwindow\") 問題說明 【1】圖1中，樣品D3、D5、D7、D11在膠圖中顯示為清晰的單一條帶，但測(cè)序結(jié)果全部為“正向雙峰”，請(qǐng)問造成這種結(jié)果的原因會(huì)有哪些？膠圖顯示為單一條帶，但是測(cè)序結(jié)果為“正向雙峰”，但是反向正常，這種現(xiàn)象是什么原因呢？ 【2】圖2中樣品E4、E2、E6、E10、E11在膠圖中顯示為清晰的單一條帶，但測(cè)序結(jié)果全部為“反向雙峰”，但正向是正常的。請(qǐng)問這是什么原因呢？ 樣品E9、E5、E7、E8條帶清晰，但是結(jié)果為“雙峰無條帶，無法回收”，樣品F2、F5也有清晰條帶，測(cè)序結(jié)果為“信號(hào)弱\無信號(hào)”，請(qǐng)問造成上述結(jié)果的原因是什么呢？ |
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12樓2017-08-14 21:49:00
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
米夏girl: 金幣+10, ★★★很有幫助 2017-08-14 20:45:27
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
米夏girl: 金幣+10, ★★★很有幫助 2017-08-14 20:45:27
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可能情況1： 重復(fù)序列，如polyT、polyA或幾個(gè)堿基重復(fù) 解決辦法： 用反向引物測(cè)互補(bǔ)鏈。 可能情況2： 質(zhì)粒測(cè)序在插入序列中出現(xiàn)套峰 解決辦法： 可能是樣品非單克隆，挑其他測(cè)序。 可能情況3： PCR產(chǎn)物測(cè)序中，某一點(diǎn)后序列變亂 解決辦法： 可能是存在移碼突變，這是正常的，也可以后測(cè)序。 可能情況4： PCR產(chǎn)物中一個(gè)或多個(gè)位置有套峰 解決辦法： 序列中存在突變，這是正常的，也可以后進(jìn)行測(cè)序。 可能情況5： PCR產(chǎn)物測(cè)序前部分雙峰 解決辦法： 引物二聚體污染或產(chǎn)物不純，后測(cè)序。 可能情況6： 質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物測(cè)序出現(xiàn)雙峰 解決辦法： 引物不純，測(cè)序時(shí)只要單一引物，請(qǐng)不要將雙向PCR引物混合；合成的引物沒有純化，或純化不好。重新合成引物測(cè)序。 如圖中標(biāo)注，沒有看到你的圖��！ |
2樓2017-08-14 19:29:59
米夏girl
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
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- 性別: MM
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
受教了！ 3樓2017-08-14 20:32:24
米夏girl
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不好意思，這個(gè)帖子可能因?yàn)榫W(wǎng)絡(luò)的問題，圖片顯示不出來了。我重新發(fā)了一個(gè)帖子，這是帖子的鏈接http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=11592511&target=1 里面補(bǔ)充了圖片。謝謝您。 |
4樓2017-08-14 20:45:06
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