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長大的小魚93新蟲 (小有名氣)
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[求助]
以提取的基因組為模板,使用PrimerSTAR酶對目的基因進(jìn)行PCR無果,求助各位大神 已有4人參與
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| 篩選到一株含有目的酶的菌株,使用NCBI查找到目的酶的基因,以提取的基因組為模板,使用PrimerSTAR酶對目的基因進(jìn)行PCR均未果。期間重新設(shè)計過引物,進(jìn)行過梯度PCR但都沒有結(jié)果,且每次跑膠結(jié)果都特別干凈,沒有任何條帶。實驗新手一枚,現(xiàn)在請問各位大神有沒有遇到過這種情況?是不是可以用Taq酶進(jìn)行一下PCR,但我是要PCR獲得目的基因送測序,怕Taq酶保真性不高有突變。希望大家可以給出一些建議,一些我可以繼續(xù)的嘗試,謝謝大家了! |
新蟲 (小有名氣)

| primerstar擴(kuò)增不出來,是因為它具有將你的引物或者模板講解的 可能性,而普通的Taq酶沒有, 所以Taq酶能擴(kuò)出來的,primerstar不一定能擴(kuò)出來,而熱啟動Taq聚合酶擴(kuò)增性能很好,不會出現(xiàn)primerstar的 情況而且大于普通酶的 靈敏度和特異性,值得 一試。如果擴(kuò)增片段大于15kb的話,推薦長擴(kuò)增聚合酶,下游實驗對精確度要求很高的話,建議使用 具有 保真性的高保真酶。 |

新蟲 (小有名氣)
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