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真好呀y(tǒng)a新蟲 (小有名氣)
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[求助]
IPTG誘導(dǎo) 已有1人參與
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加IPTG誘導(dǎo)的比未加IPTG誘導(dǎo)的多出一條帶,這條帶是目的蛋白,還是重組蛋白的呀? 或者說目的蛋白就是重組蛋白? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
木蟲 (著名寫手)
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在蛋白異源表達(dá)的實(shí)驗(yàn)中,將目的蛋白基因克隆至載體,構(gòu)建好的就是重組載體,轉(zhuǎn)化至宿主細(xì)胞進(jìn)行目的蛋白表達(dá),獲得的高量表達(dá)蛋白就是重組蛋白。這里需要注意的是,有些重組載體構(gòu)建時(shí),會(huì)帶有相應(yīng)蛋白標(biāo)簽,多用于目的蛋白的分離純化,這時(shí)候攜帶標(biāo)簽的蛋白 通常叫做融合蛋白(比如GST-目的蛋白,His-目的蛋白等),當(dāng)?shù)鞍讟?biāo)簽GST、His被切除后,獲得的蛋白才是你的目的蛋白。 當(dāng)然,目的蛋白的定義是相對(duì)的,其實(shí)還是根據(jù)你實(shí)驗(yàn)的目的來確定的,他并不是一個(gè)通用特定的名字,比如你進(jìn)行蛋白表達(dá)目的是為了獲得與原始氨基酸序列一致的蛋白,那么你的目的蛋白就是這個(gè)分子量的大小的蛋白,如果你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菫榱双@得一個(gè)攜帶標(biāo)簽的融合蛋白,那么在這個(gè)實(shí)驗(yàn)里,融合蛋白就是你的目的蛋白。 如果是簡(jiǎn)單的蛋白克隆異源表達(dá),通過page膠基本就可以確定目標(biāo)蛋白分子量位置是否有表達(dá)(這里要注意你的載體構(gòu)建時(shí)是否攜帶標(biāo)簽,如果攜帶,那么PAGE膠中就要考慮到標(biāo)簽的分子量)。當(dāng)然如果是抗體類的產(chǎn)品,可能需要更加嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)來判斷分子量的準(zhǔn)確性。 祝好 |

新蟲 (小有名氣)
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