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T_Stranger新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
表達(dá)載體與目的基因連接不上
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膠回收的表達(dá)載體pET28與目的基因neua,連接體系為:pET28:1μ,neua:4μ,solution Ⅰ:5μ,過(guò)夜連接,在卡那抗性的平板里面長(zhǎng)出來(lái)部分,全部菌P沒(méi)有條帶,自己分析應(yīng)該是抗性濃度過(guò)低,使得原始感受態(tài)長(zhǎng)出來(lái)部分,可是為什么菌P一個(gè)目的條帶都沒(méi)有,已經(jīng)做了五六次菌p都是這樣,有大神能分析一下嗎 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
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P出來(lái)基因有沒(méi)有問(wèn)題,建議先測(cè)序,不然是浪費(fèi)時(shí)間 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
| 有沒(méi)有考慮過(guò)載體自連,你應(yīng)該做個(gè)負(fù)對(duì)照,這樣就能比較出,是不是平板上長(zhǎng)出來(lái)的都是載體自連了 |
金蟲(chóng) (小有名氣)
| 要做對(duì)照,估計(jì)表達(dá)載體pET28酶切不完全,而且連接效率又不高,所以導(dǎo)致空載體長(zhǎng)出菌,就會(huì)P一個(gè)目的條帶都沒(méi)有。 |
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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是切膠回收的吧?涂板后不要超過(guò)14小時(shí),過(guò)了就長(zhǎng)敏感菌了。載體與目的基因是摩爾數(shù)比,不是體積比。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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