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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 反向PCR 測序失敗
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Melody灬絕仙新蟲 (初入文壇)
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[求助]
反向PCR 測序失敗 已有2人參與
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經歷了幾個月的摸索，終于能夠擴增出來條帶了，可是現(xiàn)在卡在了測序這一步，說是雜帶太多。 本人按照一般的反向PCR操作，先使用 EcoR I 和 Hind III 來雙酶切基因組，回收之后 T4 連接酶連接，再次回收，使用Takara公司的PrimeSTAR GXL酶來進行反向PCR擴增，結果擴得條帶，之前使用PMD18-T載體一直沒有連接上，所以直接送PCR回收產物去測序，可是一直是雜帶太多，無法測序。各位大牛有沒有什么好的建議給小弟。附一張PCR圖 IMG_20170730_180705.jpg |
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4樓2017-08-02 04:05:31
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