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TA克隆連接方向問題，實驗室小白，求大神們指教！ 已有4人參與
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TA連接方向問題。我用pMD19T simple 和帶有BamH1和Hind3的PCR產(chǎn)物鏈接，怎么驗證它的連接方向呢？ 我接下來要連接到pET-32a 上表達，已經(jīng)確定用這兩個酶切位點可以正向連在pET-32a上了，還需要驗證PCR產(chǎn)物在克隆載體上的方向嗎？ @youlinglyw 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
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Huobol
至尊木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 基因表達調(diào)控與表觀遺傳學
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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不用測定方向，測序正確即可。非得測序方向的話，用M13F-47測序引物與目的基因下游引物做質(zhì)粒PCR或菌液PCR，或者M13R-48與目的基因上游引物，產(chǎn)物電泳出現(xiàn)理論大小的亮帶，即為正向。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
15樓2017-06-10 07:40:19
2樓2017-06-09 09:53:54
3樓2017-06-09 09:54:27
MulanQahar
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- 專業(yè): 細胞生長與分裂
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第一種方法，Sequencing. 第二種是，找一個離bamh 1 或 離hind3 近的digestion site. 然后用雙酶切 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2017-06-09 10:03:36
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