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adjoq新蟲 (初入文壇)
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[求助]
DNA能跑出但PCR卻什么都沒有 已有2人參與
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我們做植物的DNA提取,跑出來的帶大都是好的,但為什么PCR卻一條帶都沒有,只有少許隱約的痕跡,能確定程序和試劑沒問題,不知道什么原因,已經(jīng)試了很多遍了,還是什么都沒有。導(dǎo)師說這是運氣問題,但我不相信,你們能告訴我在提取DNA和PCR需要注意些什么嗎?造成這種結(jié)果是什么原因?謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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木蟲 (著名寫手)
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模板量減少,50ul體系加小于100ngDNA。另外,你的DNA中RNA量太多了,加RNA酶處理一下。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

木蟲 (正式寫手)
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同意樓上說的。你的DNA含有RNA太多,需要加RNA酶處理,去除RNA,然后再測下DNA濃度。因為有RNA的存在,你之前測得DNA濃度會偏高好多。一般50微升體系DNA50-100ng就夠了。 還有就是你用DNA是為了擴啟動子? 如果基因組測序了,那么根據(jù)基因組設(shè)計的引物一般都沒問題。但是如果是根據(jù)相似種的基因組設(shè)計引物的話,往往會擴增不出來,因為啟動子不像CDS那樣保守,所以這時候確實是比較碰運氣的。 祝好 |

新蟲 (初入文壇)
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