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教洋文新蟲 (初入文壇)
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[交流]
superdex75純化蛋白 低鹽反而出峰，高鹽不出峰 已有7人參與
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大家好，請(qǐng)教一個(gè)問題，我在純化抗體片段，約50KD，雜蛋白120KD，用S75pg這個(gè)柱子�，F(xiàn)在有一個(gè)很奇怪的現(xiàn)象，用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰，在1cv時(shí)已出鹽峰。換水沖1CV后反而在電導(dǎo)下降時(shí)，即緩沖液約換成純水時(shí)出了目的蛋白峰。理論上加了鹽應(yīng)該利于蛋白下來的，為什么現(xiàn)在反而是低鹽蛋白下來了。大家對(duì)此現(xiàn)象有什么好解釋嗎？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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學(xué)習(xí)一下，我也不是很明白 一般這種柱子非特異吸附應(yīng)該很小很小吧 你的蛋白如果是高鹽導(dǎo)致像前面蟲友所說溶解性下降，應(yīng)該在你上樣前就能夠觀察到其在buffer中的穩(wěn)定性如何，而且假如堵柱子，你應(yīng)該能夠看到反壓的顯著增高 一般都應(yīng)該是 1 個(gè) CV 可以將目的蛋白洗脫出來，可能有些會(huì)在 1 個(gè) CV 后出來，但一般也是在 1.5 CV 前出來 你的情況有咨詢過 GE 的工程師嗎？ |
教洋文17樓2018-05-16 19:43:25
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鹽溶鹽析，可能對(duì)于你這個(gè)蛋白離子強(qiáng)度低一些更合適吧，可以把氯化鈉去掉，再跑一次superdex75看看分離情況。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2017-10-14 21:27:38
walking dead
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高鹽洗脫并不適宜所有蛋白的洗脫，有些會(huì)在高鹽時(shí)變性或者沉淀，自然無法出峰。所以要選擇適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度的洗脫液。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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3樓2017-10-18 07:39:42
教洋文
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4樓2017-10-24 23:57:57
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