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FionaD新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
板子長(zhǎng)不出菌啊好著急 已有3人參與
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我們實(shí)驗(yàn)室三個(gè)人做基因克隆，一個(gè)用的pEASY-blunt克隆載體，用的卡納的板子，我們倆用的blunt E1表達(dá)載體，用的氨芐的板子，但是連接轉(zhuǎn)化涂平板之后都長(zhǎng)不出菌是為啥��！昨天用質(zhì)粒做了對(duì)照，質(zhì)粒就長(zhǎng)了滿滿一板子，說(shuō)明感受態(tài)沒(méi)問(wèn)題啊，操作用的都是同一套，而且三個(gè)人誰(shuí)做都長(zhǎng)不出來(lái)，實(shí)在想不出來(lái)是哪里有問(wèn)題啊……各位師兄師姐幫幫忙啊 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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sherlock0088
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
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- 在線: 25.6小時(shí)
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- 注冊(cè): 2014-07-24
- 專業(yè): 遺傳學(xué)研究新技術(shù)與方法
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這么看，PCR沒(méi)問(wèn)題，回收沒(méi)問(wèn)題，感受態(tài)沒(méi)問(wèn)題，抗生素沒(méi)問(wèn)題，可能載體的問(wèn)題。你可以換個(gè)普通的T載體，別用全式金的，TAKARA或者其他公司的。正常高保真PCR完成后，加入Taq酶72度保溫30分鐘，回收之后連T載體然后轉(zhuǎn)化感受態(tài)。一般來(lái)說(shuō)T載體轉(zhuǎn)化效率挺高的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
19樓2017-06-01 19:05:21
sherlock0088
金蟲(chóng) (小有名氣)
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請(qǐng)?jiān)敿?xì)描述你克隆的過(guò)程，包括所用的體系（包括但不限于PCR體系，連接體系），克隆片段長(zhǎng)度，產(chǎn)物濃度，A260/A260，A260/A230，nanodrop峰圖或吸光度曲線，溶解或回收用的是什么 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2017-05-31 11:42:58
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2017-05-31 12:54:02
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這個(gè)應(yīng)該是T載體吧，最好不要用pfu之類的酶擴(kuò)增，用普通taq酶擴(kuò)，很好連接的喔 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2017-05-31 14:31:45
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