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[求助]
TA克隆連接方向問題,實(shí)驗(yàn)室小白,求大神們指教! 已有4人參與
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TA連接方向問題。我用pMD19T simple 和帶有BamH1和Hind3的PCR產(chǎn)物鏈接,怎么驗(yàn)證它的連接方向呢? 我接下來要連接到pET-32a 上表達(dá),已經(jīng)確定用這兩個(gè)酶切位點(diǎn)可以正向連在pET-32a上了,還需要驗(yàn)證PCR產(chǎn)物在克隆載體上的方向嗎? @youlinglyw 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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是的。在設(shè)計(jì)引物時(shí)就要注意酶切位點(diǎn),你的5'端用bamhi ,3端用hindIII是可以的,方向不會有問題。載體構(gòu)建好后你可以進(jìn)行測序驗(yàn)證,也可以pcr驗(yàn)證,用T7promoter引物和你的3’端引物進(jìn)行PCR,能p出來就是正向。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
金蟲 (正式寫手)
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第一種方法,Sequencing. 第二種是,找一個(gè)離bamh 1 或 離hind3 近的digestion site. 然后用雙酶切 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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