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Melody灬絕仙新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
反向PCR 測(cè)序失敗 已有2人參與
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經(jīng)歷了幾個(gè)月的摸索，終于能夠擴(kuò)增出來(lái)?xiàng)l帶了，可是現(xiàn)在卡在了測(cè)序這一步，說(shuō)是雜帶太多。 本人按照一般的反向PCR操作，先使用 EcoR I 和 Hind III 來(lái)雙酶切基因組，回收之后 T4 連接酶連接，再次回收，使用Takara公司的PrimeSTAR GXL酶來(lái)進(jìn)行反向PCR擴(kuò)增，結(jié)果擴(kuò)得條帶，之前使用PMD18-T載體一直沒(méi)有連接上，所以直接送PCR回收產(chǎn)物去測(cè)序，可是一直是雜帶太多，無(wú)法測(cè)序。各位大牛有沒(méi)有什么好的建議給小弟。附一張PCR圖 IMG_20170730_180705.jpg |
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您好，想問(wèn)問(wèn)反向pcr的步驟是什么��？怎么找酶切位點(diǎn)？還有引物的設(shè)計(jì)要求是啥？我剛接觸，沒(méi)找到相關(guān)方法，能提供一下么  發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
19樓2018-03-01 15:21:48
Melody灬絕仙
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2樓2017-08-01 17:20:49
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3樓2017-08-02 01:00:21
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4樓2017-08-02 04:05:31
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