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女少年93新蟲 (初入文壇)
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[求助]
CTAB法從人體拭子中提取總DNA，跑不出條帶 已有1人參與
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求助大家，我用的這個protocol從人體拭子中提取總DNA，我和我同學(xué)每個人分別提了一次，都跑不出條帶，不知道該怎么辦。是protcol有問題嗎？定量結(jié)果我忘記拍了，濃度基本幾十ng/ul作用，260/280也不好，小于1.8，肯定是有污染，但是不至于跑不出條帶吧，希望有大神指出問題。這兩天我也會再做一次加蛋白酶k看看如何 下面是我們用的protocol 1) 樣品：吸取1000ul CTAB 裂解液（65℃預(yù)熱）至2.0ml EP 管里，加入溶菌酶10ul，將適量的樣品加入裂解液中，65 度水浴，期間顛倒混勻數(shù)次，以使樣品充分裂解。 2) 低溫12000rpm離心5min，離心取上清，加等量酚（Ph8.0）：氯仿：異戊醇（25：24：1），顛倒混勻，12000rpm離心10min。 3) 取上清，加等量氯仿：異戊醇（24:1），顛倒混勻，12000rpm 離心10min。 4) 吸取上清至1.5mL 離心管里，加入異丙醇，上下?lián)u晃，-20 度沉淀。 5) 12000rpm 離心10 分鐘，倒出液體，注意不要倒出沉淀。用1ml 75％乙醇洗 滌2 次，剩余的少量液體可再次離心收集，然后用槍頭吸出。 6) 超凈工作臺吹干或者室溫晾干（DNA 樣品不要過于干燥，否則很難溶解） 7) 加入ddH2O 溶解DNA 樣品，必要時可于55-60?C 下孵育10min 助溶。 8) 加RNase A 1ul 消化RNA，37 度放置15min。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2017-04-19 23:56:52
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