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曼陀羅愛上黑夜新蟲 (初入文壇)
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[求助]
測序問題 已有5人參與
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設(shè)計引物做pcr，產(chǎn)物電泳后條帶很亮，可是為什么測序總是測不出來，測序結(jié)果總是失敗？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2017-08-24 15:25:36
yufeiwaner
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5樓2017-08-24 16:48:32
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之前有把pcr產(chǎn)物直接送去測序，pcr產(chǎn)物測序需要很高的濃度，你最好膠回收后測一下濃度，一種可能是雖然膠很亮但回收效率不高，這個除了測濃度你可以回收完取一點再跑一次膠看一下，看看亮度怎么樣。另一種可能是那個條帶是雜帶，希望對你有幫助 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2017-08-24 19:12:41
18253592055
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8樓2017-08-24 19:13:24
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11樓2017-08-24 20:13:27
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12樓2017-08-26 06:35:31
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14樓2017-08-27 17:55:12
17樓2017-09-05 21:00:52
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同意該說法，并不是所有pcr產(chǎn)物測序都需要連載體，根據(jù)你的目的需要來確定。pcr產(chǎn)物測序很容易的，我們送的公司只要電泳能看見條帶，基本上就能測出來，對濃度要求并不高，可能因公司而異吧。若pcr產(chǎn)物有非特異片段，那測序出來肯定是亂峰，這時建議連載體測序。有時復(fù)雜片段（比如高GC，富含poly結(jié)構(gòu)等等）都會影響測序結(jié)果，建議測序時注明該特征。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
18樓2017-09-11 15:31:52
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補(bǔ)充，我們都是直接送pcr產(chǎn)物測序，讓公司回收的。建議和測序公司技術(shù)多溝通，了解他們的樣品處理流程和測序要求。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
19樓2017-09-11 15:33:47
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4樓2017-08-24 15:58:48
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6樓2017-08-24 18:12:29
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9樓2017-08-24 20:09:49
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10樓2017-08-24 20:10:29
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