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msssgdmn123新蟲 (小有名氣)
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[求助]
跑PCR后帶型總是很丑 已有2人參與
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跑出的條帶是彎曲的，感覺兩邊跑的快，中間跑的慢，不知道是什么原因，但是marker跑的還可以，最近都是這種情況，簡直要瘋，電壓一直用的不大，80,70,60都用過，都是這樣 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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msssgdmn123
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2樓2017-10-08 16:57:45
mlxmiao
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3樓2017-10-08 19:00:59
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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個(gè)人觀點(diǎn)，膠凝結(jié)時(shí)間不夠（放在冰箱靜置一段時(shí)間效果是不錯(cuò)），拔梳子出現(xiàn)問題外，還有可能是以下方面的原因： 1、電泳時(shí)電壓稍高，造成條帶彎曲，樓主可以在剛開始電泳的時(shí)候用較低電壓，等產(chǎn)物跑進(jìn)凝膠一段距離后再把電壓調(diào)大，甚至就使用稍低的電壓，當(dāng)然也不能太低，如果跑得時(shí)間太長，PCR產(chǎn)物也會降解，條帶淡化。 2、倒膠時(shí)是不是溫度比較低，造成的膠不均勻，我看樓主的膠比較均勻，所有條帶都是W型，不是這方面的問題。 3、感覺樓主的上樣量還是少了點(diǎn)，如果太少，會造成上樣產(chǎn)物隨著移液器的打入呈現(xiàn)彎曲的形狀，電泳結(jié)果也可能會這樣，建議樓主加大上樣量，這樣PCR產(chǎn)物充滿點(diǎn)樣孔就會比較直，比較均勻。 |
4樓2017-10-08 20:00:21
5樓2017-10-09 00:17:33
ken19860823
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6樓2017-10-09 07:38:40
ken19860823
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7樓2017-10-09 07:39:00
ken19860823
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8樓2017-10-09 07:40:34
9樓2017-10-09 10:13:46
635270fmaifx
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你好，從圖中可以看出，你的pcr引物特異性不是特別好，有好多非特異性擴(kuò)增，還有你的mark跑的不錯(cuò)，就要考慮你的pcr產(chǎn)物效果啦供參考 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2017-10-09 13:57:37
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