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教洋文新蟲 (初入文壇)
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[交流]
superdex75純化蛋白 低鹽反而出峰,高鹽不出峰 已有7人參與
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大家好,請教一個問題,我在純化抗體片段,約50KD,雜蛋白120KD,用S75pg這個柱子,F(xiàn)在有一個很奇怪的現(xiàn)象,用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰,在1cv時已出鹽峰。換水沖1CV后反而在電導(dǎo)下降時,即緩沖液約換成純水時出了目的蛋白峰。理論上加了鹽應(yīng)該利于蛋白下來的,為什么現(xiàn)在反而是低鹽蛋白下來了。大家對此現(xiàn)象有什么好解釋嗎? 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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鹽溶鹽析,可能對于你這個蛋白離子強度低一些更合適吧,可以把氯化鈉去掉,再跑一次superdex75看看分離情況。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
金蟲 (小有名氣)
填料制備和蛋白純化專家
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高鹽洗脫并不適宜所有蛋白的洗脫,有些會在高鹽時變性或者沉淀,自然無法出峰。所以要選擇適當(dāng)?shù)碾x子強度的洗脫液。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
新蟲 (初入文壇)
銀蟲 (小有名氣)

專家顧問 (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗: +702 |
新蟲 (初入文壇)
送紅花一朵 |
我并不是專門換緩沖液的,是在沖了1cv的緩沖液發(fā)現(xiàn)蛋白沒出來,打算結(jié)束實驗,用水洗柱子時突然有一個蛋白峰出來,接了樣品跑了才發(fā)現(xiàn)是我的樣品,所以是在很偶然的情況下發(fā)現(xiàn)我的蛋白出峰不正常,并不是專門換來換去,F(xiàn)在只是想對這種情況作出解釋才來請教一下大家 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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