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Whynot9527新蟲 (初入文壇)
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[交流]
發(fā)酵液未知物的分離 已有4人參與
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一種細(xì)菌的發(fā)酵液中存在可以抗病毒的物質(zhì)，現(xiàn)在要把它分離出來，我設(shè)計(jì)的大致方案是用石油醚，乙酸乙酯，氯仿分級萃取，得到三個(gè)有機(jī)相，最后剩下水相，然后分別去做抗病毒實(shí)驗(yàn)，不知道這樣可不可以？如果某一有機(jī)相有抗病毒效果，接下來該怎么做？水相有效果又該怎么做？ 求大神幫助�。�！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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duanmuxi3377
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我們一般是這樣處理的：先過濾，濾掉菌絲體。然后把濾液濃縮一下（如果濾液量少可不濃縮），用乙酸乙酯萃取濃縮液，最后就有兩部分了，乙酸乙酯相和水相，把這兩部分還有發(fā)酵液原液分別測活，你就知道活性化合物在哪部分了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2018-04-18 18:17:35
Whynot9527
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謝謝回復(fù)，我做的細(xì)菌，沒有菌絲。其實(shí)我是想知道我的方案可不可行，如果萃取出來有效果，后續(xù)的實(shí)驗(yàn)大致該怎么進(jìn)行？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2018-04-19 00:22:30
duanmuxi3377
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我一直在做鏈霉菌還真菌次級代謝產(chǎn)物的研究，沒有坐過細(xì)菌，我們都是只用乙酸乙酯萃取，分成乙酸乙酯和水兩部分，然后測活，再分離有活性的部分。從做真菌的角度講，你萃取成這么多分不太可行而且效率會(huì)比較低，代謝產(chǎn)物里小極性的東西還是比較少的，用氯仿萃可能萃不出來什么東西，直接用乙酸乙酯萃取就夠了。不知道你學(xué)的是什么專業(yè)，有沒有做過藥化的分離工作，后期具體分離我們主要是用MCI、大孔樹脂，硅膠，ODS，高效液相等分離手段對有效成分分離。請問你打算發(fā)酵多少升？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2018-04-20 09:10:00
Whynot9527
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謝謝你的回復(fù)。我是看了文獻(xiàn)還有論壇上其他人建議才用的分級萃取，畢竟不知道活性物質(zhì)的理化性質(zhì)，還是想試著先做一下，按你說的，我覺得至少乙酸乙酯相會(huì)有活性吧。還有我發(fā)酵的量也就幾十毫升，因?yàn)樽龌钚詫?shí)驗(yàn)每次也就幾毫升發(fā)酵液的量，就是不知道萃取能不能把活性物質(zhì)盡可能萃出來？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2018-04-21 15:32:44
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恩，可以試試的。你是想確定最終有活性的化合物還是想知道在哪個(gè)部位就可以呀？我們發(fā)酵單純測活一般會(huì)發(fā)酵50毫升，如果想要分離得到活性化合物我們一般最少發(fā)酵三十升。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2018-04-21 20:34:13
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再次感謝您的回復(fù)！ 我最終目的只是要確定是什么物質(zhì)，剛開始還是先確定所在部位。你發(fā)酵二三十升是得到純的活性物質(zhì)膏子吧，這個(gè)量太大，我暫時(shí)只是做定性實(shí)驗(yàn)，確定物質(zhì)是什么就行。還有我想問一下，你們一般萃取時(shí)的有機(jī)溶劑和水比例是多少？萃了幾次？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2018-04-21 21:07:53
duanmuxi3377
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我們發(fā)酵30升，最后得到純的單體化合物也就幾毫克，三毫克才夠打核磁的才能確定化合物的結(jié)構(gòu)。萃取我一般是1：1，萃取三次。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2018-04-22 07:31:35
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9樓2018-04-22 16:28:54
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你好 我按這個(gè)方法做的 下一步我需要從乙酸乙酯相中得到我要的物質(zhì) 下一步改該怎么辦呢 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2018-05-03 14:37:21
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