 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 1264 | 回復(fù): 10 | |||
青檸檬PCR新蟲 (正式寫手)
|
[求助]
pcr 已有1人參與
|
|
想問下有沒有人在設(shè)計(jì)引物時(shí)，以環(huán)裝質(zhì)粒為模板6300bp，幾乎要擴(kuò)增下來(lái)整個(gè)片段，然后引物r為61bp，gc含量62.3%，Tm99.8，f為41bp，gc含量53.7%，Tm86，然后用了高保真和pcr enhancer，結(jié)果有個(gè)1300左右的條帶， 想問下是什么問題 @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有229人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
|
為什么要搞這么長(zhǎng)的引物？都是特異匹配的嗎？以環(huán)狀質(zhì)粒做定點(diǎn)突變，也是要擴(kuò)增下整個(gè)質(zhì)粒。并不難。你再摸索一下條件吧，1300說明引物退火到非目的序列了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2018-07-27 23:55:29
青檸檬PCR
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1555.6
- 散金: 151
- 紅花: 1
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 617
- 在線: 50.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 7461277
- 注冊(cè): 2017-11-12
- 性別: MM
- 專業(yè): 有機(jī)合成
3樓2018-07-28 00:00:35
青檸檬PCR
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1555.6
- 散金: 151
- 紅花: 1
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 617
- 在線: 50.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 7461277
- 注冊(cè): 2017-11-12
- 性別: MM
- 專業(yè): 有機(jī)合成
4樓2018-07-28 00:01:13
|
明白了，你加的6his或者其他酶切位點(diǎn)或保護(hù)堿基都不要算，Tm要以嚴(yán)格與模板堿基互補(bǔ)配對(duì)的靠近3'端計(jì)算，一般這段序列不超過30bp就夠了。我猜你程序退火高了。以質(zhì)粒做模板相比基因組是非常好擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)，注意不要加太多質(zhì)粒模板吧 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2018-07-28 00:07:32
每天進(jìn)步點(diǎn)
禁蟲 (初入文壇)
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
6樓2018-07-28 00:08:09
青檸檬PCR
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1555.6
- 散金: 151
- 紅花: 1
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 617
- 在線: 50.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 7461277
- 注冊(cè): 2017-11-12
- 性別: MM
- 專業(yè): 有機(jī)合成
|
退貨溫度55度，那個(gè)一步同源要和同源壁重合20左右，特異引物也要20bp，再加酶切位點(diǎn)什么的，18bphis夠長(zhǎng)，這個(gè)退火溫度要改嗎，看有人加DMSO 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2018-07-28 00:13:43
青檸檬PCR
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1555.6
- 散金: 151
- 紅花: 1
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 617
- 在線: 50.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 7461277
- 注冊(cè): 2017-11-12
- 性別: MM
- 專業(yè): 有機(jī)合成
8樓2018-07-28 00:14:27
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
當(dāng)然要改啊，只算3端匹配的。你要不想計(jì)算直接無(wú)腦65℃touchdown 10個(gè)循環(huán)，然后55退火好了，除非引物太糟糕，這個(gè)基本會(huì)work的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2018-07-28 00:20:08
10樓2018-07-28 00:22:25
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 青檸檬PCR 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +5 | 脫穎而出 2026-03-16 | 16/800 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +5 | ytter 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +4 | CX 330 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +4 | z1z2z3879 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢(mèng)里的無(wú)言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +9 | 申子申申 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 余意卿 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +3 | baibai1314 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械專碩299求調(diào)劑至材料 +3 | kkcoco25 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +10 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國(guó)石油大學(xué)（華東） 本科齊魯工業(yè)大學(xué) +3 | 石能偉 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +3 | 八6八68 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +4 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3 | Eember. 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | 劉夢(mèng)微 2026-03-15 | 3/150 |
|