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ptlyxiao新蟲 (正式寫手)
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[交流]
求肺炎克雷伯菌電擊轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)步驟 已有2人參與
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求高人指導(dǎo)!我從2月份開始一直做肺炎克雷伯菌感受態(tài)細(xì)菌，質(zhì)粒電擊轉(zhuǎn)化，可就是一直轉(zhuǎn)不進(jìn)去，焦慮憔悴！求哪位高人有做過的能分享一下如何做的？謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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我去年做過一些KP的電轉(zhuǎn)化，操作過程與e.coli基本相同。Kp電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備大致為：搖OD至0.5左右，冰浴15min，用冰10%甘油洗滌2遍，液氮速凍后-80度凍存。 電擊條件為：2.5kv, 200Ω， 25uF，2mm電轉(zhuǎn)杯，bio-rad電轉(zhuǎn)儀。電擊后LB液體復(fù)蘇1h，涂布相應(yīng)抗性平板。 一般情況下，轉(zhuǎn)化效率很高。 我看到你是感染專業(yè)的，是否你的KP是病人身上的臨床分離菌株？有些臨床分離菌株確實(shí)遺傳操作較為困難。你可以換一個KP菌株試試，也許不是你電轉(zhuǎn)的問題，而是那個菌株的問題。 祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
2樓2019-05-05 19:54:05
ptlyxiao
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3樓2019-05-11 11:13:00
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4樓2019-05-14 16:59:58
ptlyxiao
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5樓2019-05-18 13:16:45
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