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我好暴躁啊新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
雙酶切連接不成功 已有7人參與
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雙酶切連接這么難嗎，怎么就連不上！目的片段3300，載體3000，酶是NEB的。,雙酶切后10ulT4連接體系，體積比設(shè)了好幾個(gè)，轉(zhuǎn)化子長(zhǎng)了好多，挑菌，菌液PCR都是假陽(yáng)性，欲哭無(wú)淚( ˙-˙ )，該怎么辦？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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藍(lán)馬追風(fēng)
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 在線: 36.3小時(shí)
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- 注冊(cè): 2014-12-29
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
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1、確定確實(shí)切開(kāi)了(片段如果PCR擴(kuò)增得到，沒(méi)加保護(hù)堿基，酶切效率是很低的)；2、連接時(shí)，片段和載體摩爾比控制在5-10；3、只用菌落PCR可能沒(méi)鑒定出來(lái)。實(shí)在不行可以先連T載，再切 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
22樓2017-06-02 00:18:38
2樓2017-05-30 22:01:09
3樓2017-05-30 22:13:28
kangaroo0513
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 154 (高中生)
- 金幣: 2277.4
- 散金: 100
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- 蟲(chóng)號(hào): 2621902
- 注冊(cè): 2013-08-28
- 專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)輸
4樓2017-05-30 22:32:27
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