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yafen0628金蟲 (正式寫手)
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PCR污染，存在假陽(yáng)性帶，，盼大神急救 已有3人參與
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我在PCR過程中遇到很奇葩的現(xiàn)象，陰性對(duì)照組（模板為水），會(huì)P出來(lái)陽(yáng)性條帶，而且與目的帶（目的帶在186bp左右）大小在同一位置。 1，嘗試了更換不同的退火溫度（58/62/65），假陽(yáng)性帶依然存在。。。。, 2，曾經(jīng)以為假陽(yáng)性帶會(huì)是交叉引物二聚體類產(chǎn)物，嘗試了PCR體系中添加5%DMSO以及將引物100℃煮沸再用，結(jié)果還是存在假陽(yáng)性。。 3，試著換掉了TAQ酶及DNTP還有水，依然是徒勞。。。 下圖的左一模板為水，后面依次為不同濃度的陽(yáng)性模板。。PCR的退火溫度為58℃，循環(huán)數(shù)目35. 我想請(qǐng)教下各位大神，還有什么好的辦法來(lái)找到PCR污染或者假陽(yáng)性帶的原因，或者是不是因?yàn)槟康膸。圆艜?huì)遇到這種問題呢，嘗試了各種辦法，最近真是被愁死了，要P瘋了。。。 20170516 HHV8 35 cycle.JPG |
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yafen0628
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22樓2017-06-24 12:20:07
as1688816
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2樓2017-06-22 23:21:05
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3樓2017-06-23 06:48:17
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-06-23 23:23:05
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-06-23 23:23:05
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哦，那就不知道原因了，我以前也遇到過這種問題，不過我用的是mix,當(dāng)時(shí)換個(gè)mix就好了，也懷疑過水有問題，不過換了很多水還是有帶，一般是很短的片段，如果擴(kuò)的是很長(zhǎng)的片段，一般不會(huì)有帶的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-06-23 08:30:53
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