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yafen0628金蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR污染，存在假陽性帶，，盼大神急救 已有3人參與
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我在PCR過程中遇到很奇葩的現(xiàn)象，陰性對照組（模板為水），會P出來陽性條帶，而且與目的帶（目的帶在186bp左右）大小在同一位置。 1，嘗試了更換不同的退火溫度（58/62/65），假陽性帶依然存在。。。。, 2，曾經(jīng)以為假陽性帶會是交叉引物二聚體類產(chǎn)物，嘗試了PCR體系中添加5%DMSO以及將引物100℃煮沸再用，結(jié)果還是存在假陽性。。 3，試著換掉了TAQ酶及DNTP還有水，依然是徒勞。。。 下圖的左一模板為水，后面依次為不同濃度的陽性模板。。PCR的退火溫度為58℃，循環(huán)數(shù)目35. 我想請教下各位大神，還有什么好的辦法來找到PCR污染或者假陽性帶的原因，或者是不是因為目的帶偏小，所以才會遇到這種問題呢，嘗試了各種辦法，最近真是被愁死了，要P瘋了。。。 20170516 HHV8 35 cycle.JPG |
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yafen0628
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3樓2017-06-23 06:48:17
as1688816
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2樓2017-06-22 23:21:05
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-06-23 23:23:05
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-06-23 23:23:05
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哦，那就不知道原因了，我以前也遇到過這種問題，不過我用的是mix,當(dāng)時換個mix就好了，也懷疑過水有問題，不過換了很多水還是有帶，一般是很短的片段，如果擴(kuò)的是很長的片段，一般不會有帶的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-06-23 08:30:53
971731043
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5樓2017-06-23 09:04:09
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