 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 4/1 | 返回列表 |
| 查看: 3762 | 回復(fù): 36 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
片段連了半年了，死活連不上，要看再不行就要延期了，求大神幫忙分析一下 已有3人參與
|
||
|
首先我一共要連接三個(gè)片段，直接連接表達(dá)載體，這三個(gè)片段都屬于同一個(gè)基因家族，就是同源性不高，片段是pcr得到的（提取的研究材料全RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA），采用雙酶切的方法，選取的是sal1和BamH1兩個(gè)酶切位點(diǎn)，這兩個(gè)酶切位點(diǎn)在載體上離得很近，序列是（GTCGAC）TCTAGA（GGATTC），只間隔了6bp，不過(guò)我通過(guò)先用sal1酶切在用BamH1酶切的方法已經(jīng)連接上了兩個(gè)片段，這能說(shuō)明我的載體酶切肯定是沒問(wèn)題的吧？而且三個(gè)片段都是同一操作流程，也就是說(shuō)我設(shè)計(jì)的引物也沒問(wèn)題吧？片段酶切也沒問(wèn)題吧？但是，第三個(gè)片段，也是最關(guān)鍵的片段，就是死活連不上去，連上那兩個(gè)片段其實(shí)就用了三個(gè)星期……本來(lái)我想著，因?yàn)樵瓉?lái)的載體酶切后不好判斷酶切程度，我可以通過(guò)酶切已經(jīng)連上目的片段的重組質(zhì)粒，跑膠回收酶切好的載體來(lái)做連接，但是，重組質(zhì)粒，一切就碎，就跟pcr的引物二聚體似的，根本沒法回收，重新提了一批原始質(zhì)粒和片段做酶切，用50的體系，酶各加2，酶切4小時(shí)，跑膠發(fā)現(xiàn)，竟然也被切碎了，然后，減小酶量，各加1，發(fā)現(xiàn)還是碎了，是因?yàn)檫@次用的大體系酶切么？我之前酶切用的25的體系……求各位大神幫忙分析一下，描述比較混亂，我現(xiàn)在特別絕望…… @飛約瘋?cè)嗽?/u> @biostar2009 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
ken19860823» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有78人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
huhao0230
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 415
- 散金: 20
- 帖子: 42
- 在線: 11.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1977031
- 注冊(cè): 2012-09-05
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
33樓2017-09-22 15:26:18
2樓2017-09-16 23:20:29
3樓2017-09-16 23:21:54
4樓2017-09-17 09:42:54
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑 +8 | 皮皮皮123456 2026-03-22 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300) +5 | 番茄頭--- 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | 某某某某位 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +3 | 匹克i 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +10 | 梁梁校校 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +8 | 苑豆豆 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +5 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達(dá)問(wèn)津 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 323求調(diào)劑 +6 | 洼小桶 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +11 | 冷笙123 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +7 | Tyoumou 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(qǐng)(333分) +5 | holy J 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +12 | yangfz 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +6 | www_q 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +4 | @taotao 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無(wú)極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|