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會(huì)思考的大鵝新蟲 (初入文壇)
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[求助]
用磷酸鹽做流動(dòng)相經(jīng)常堵塞單向閥，要怎么選擇代替的流動(dòng)相？ 已有2人參與
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我的流動(dòng)相是A 磷酸二氫銨（pH7.4):甲醇=95：5 B 甲醇：磷酸二氫銨（pH7.4)=95：5 先5%B2min，接著梯度升至60%B到20min，保持60%B15min，整個(gè)過程35min。流速為1ml/min。 每次都是頭一天跑完沒有問題，但是柱壓很高達(dá)到2500psi，然后第二天在用同樣的方法跑，就會(huì)堵塞單向閥，用的是waters e2695，出故障的時(shí)候顯示lost prime，應(yīng)該就是單向閥堵了。 是不是因?yàn)槲矣玫氖橇姿猁}，所以它結(jié)晶了堵了，還是因?yàn)閱蜗蜷y確實(shí)太臟了，因?yàn)橹耙捕铝撕脦状巍?br /> 如果是我的流動(dòng)相的問題，我換成A磷酸二氫銨（pH 7.4）B甲醇，不將它們混合做流動(dòng)相，會(huì)有所改善嗎？ 還是我直接換成其他流動(dòng)相，既然磷酸鹽愛結(jié)晶，我可以替換成什么流動(dòng)相才是比較合適的？  |
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wyy080214
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4樓2017-03-09 18:00:43
chuanqi_snk
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【答案】應(yīng)助回帖
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1、首先，磷酸鹽是HPLC中經(jīng)常使用的緩沖液，應(yīng)該不是造成壓力高的主要原因，不確定你用的緩沖鹽濃度多大，一般不建議超過50mmol,HPLC走緩沖鹽溶液，一定要在使用前后，使用不含鹽的溶液（例如10~20%的甲醇）充分沖洗。 2、其次，緩沖液的pH值呈弱堿性，長(zhǎng)期使用的話，不知道色譜柱是否耐受； 3、最后，是否由于有機(jī)相甲醇比例多高，導(dǎo)致鹽析出，建議優(yōu)化流動(dòng)性比例，例如：A相為緩沖鹽：甲醇=8:2，B相為緩沖鹽：甲醇=2:8 |
2樓2017-03-09 17:28:53
會(huì)思考的大鵝
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3樓2017-03-09 17:49:29
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5樓2017-03-13 08:05:37
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