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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取質量
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ufolt16新蟲 (初入文壇)
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RNA提取質量 已有5人參與
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使用方法：Trizol 目的：qPCR 樣品：番茄葉片 問題描述：目前處于預實驗階段，前后提取了幾次番茄葉片RNA，之前并未太過關注電泳圖（因為并沒有特別處理，就是一般的跑DNA的膠和緩沖液，私以為電泳可能也有降解效果可能會不好，但是如果嚴格處理，又太耗時耗力），只是著重測了濃度和OD比值，OD260：OD280一般在1.9到2.0左右，濃度卻很奇怪，有時同時取得兩個樣品，一個六七百ng，一個卻只有八九十一百多，很是糾結。后來嘗試進行qPCR，主要還是想摸摸條件，結果非常不好，被老板罵，要我跑電泳確認RNA質量，結果前后提取的RNA跑了幾次電泳，效果都不好，自己也沒信心，不知道這RNA提成什么樣才能進行下一步試驗。有幾個問題希望專家解疑： 1. 提取RNA濃度差異如此大是什么原因？ 2. 就目前提出的RNA的電泳圖看質量，有什么問題，下一步怎么改進？ 3. 什么程度是滿足qPCR的高質量RNA PS：染色是跑完膠扔到EB里染色，每次染色時間沒有特意記，可能有染色不充分的，比如最后一張圖。。。。 第一次提取 第二波，若干次提取，一起跑的電泳 第三次 第四次，第一泳道是第三次提的，2345是第四次提的，1234按照3ul+6ul水上樣，5是4按照6ul上樣 第五次@biostar2009@飛約瘋人院@wizardfan@youlinglyw |
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4樓2017-05-02 16:57:01
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2樓2017-05-02 16:39:40
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請問上樣量是什么意思？您看我理解對嗎？trizol的比例是50-100mg：1ml，您的意思是不是指我的葉片按10.20.40…mg還是加1ml trizol來算，請問是這個意思嗎 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-05-02 16:53:04
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梯度的話不太現(xiàn)實…我是用研缽研磨再用小勺收集到ep管，擔心液氮干了會解凍造成降解，這一步都是快了再快的收集，損失其實是蠻大的，所以每次樣品都是過量研磨的怕?lián)p失太大，一般都是收集的差不多到ep管的0.1ml那就加trizol了… 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-05-02 17:10:11
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