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lpz598417258鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
多糖分離純化求助，DEAE-52 已有2人參與
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本人做多糖純化，梯度洗脫，跑了四次，都不理想。求哪位分離純化幫忙，求順利畢業(yè)！！ 現(xiàn)在把就具體的參數(shù)說明下：填料DEAE-52，柱子為2.6*40，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 NaCl Tris-HCl溶液洗脫，多糖分子量是10萬 Da左右。 講實話，這些圖我自己都看不下去了。實驗的我做的真是沒脾氣，想請教哪位大神可以幫我分析下這些洗脫圖。給點意見，到底是我參數(shù)沒有設(shè)定好，還是柱子或者填料選擇有問題？？ 第一次，上樣量100mg 流速：1ml/ml 每管1min 每個梯度跑80根管，但隔空測定，每個梯度40根管。 第二次，參數(shù)同第一次。第一次單是用緩沖液就直接全沖出來了，懷疑是柱子沒填實，此次將柱子附加了填料，并壓實。 第三次，參數(shù)同第一次。 第四次，總結(jié)前三次，懷疑是流速太大，低極性濃度時就全洗出了。這次將填料用酸堿和水處理，再生了下。參數(shù)調(diào)整為上樣量為25mg, 0.5 ml/min 每個梯度收集20根管，沒根管10min。依次測定 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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lpz598417258: 金幣+5, ★★★很有幫助 2016-07-25 23:12:30
lpz598417258: 金幣+5, ★★★很有幫助 2016-07-25 23:12:30
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我覺得可能是填料沒有處理好。第一，再生后的填料要進行脫氣，如果脫氣不好會影響你洗脫的結(jié)果；第二，脫氣后的填料在裝柱的時候要進行引流，而且不能出現(xiàn)斷層，在裝柱過程中，要在柱子底部留1-2cm緩沖液，裝柱過程中恒流泵要開著；第三，裝柱后要進行平衡，用緩沖液平衡柱子，直到柱子的高度和液位的高度不再變化才可以上樣，不能壓柱子，最好在柱子上層加一張定性濾紙，防止上樣過程中，破壞柱子表層的平面。第四，平衡柱子的流速一般要高于洗脫時的流速。 之前做分離的一些心得，希望對你有用！ |
5樓2016-07-25 22:14:55
lpz598417258
鐵蟲 (初入文壇)
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3樓2016-07-20 17:43:41
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