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555weiteng新蟲 (初入文壇)
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[求助]
絲狀真菌基因敲除 篩不出完全敲除的菌 已有2人參與
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絲狀真菌用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法做基因敲除，上下游同源臂分別為3KB，在抗性板上出現(xiàn)的轉(zhuǎn)化子做PCR驗證，若敲除掉應(yīng)該只有一條3KB的電泳條帶，野生型只有一條1KB的帶�，F(xiàn)在挑了100個菌，出現(xiàn)的是只有1KB和兩條帶都有的情況。出現(xiàn)兩條帶的菌用另一對引物驗證，顯示部分基因組發(fā)生雙交換，但不完全。請問一下做過真菌敲除實驗的高手們，是菌沒挑對，還需繼續(xù)挑，還是需要對那些部分雙交換的菌進行純化，知道篩到純的。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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555weiteng
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6樓2018-03-20 11:45:32
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這是沒有同源重組，直接插入突變了吧，一百個都沒有出來，再挑菌成功希望也不是很大，出現(xiàn)兩條帶的八成是插入突變了，建議重新轉(zhuǎn) 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2017-12-01 15:50:29
4樓2017-12-02 11:35:13
lggy1321
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5樓2017-12-23 22:50:14
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