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關(guān)Q想畢業(yè)新蟲 (小有名氣)
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[求助]
pMD19-T載體連接，怎么都連接不上是怎么回事？求大神 已有6人參與
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我的目的片段36Kb左右，用的酶是TaKaRa的PreMix Taq，連接體系是1μl19-T，1.5μl回收產(chǎn)物，2.5μl水，5μlSolution Ⅰ，16°C，30分鐘，轉(zhuǎn)入DH5α感受態(tài)，然后用氨芐板篩，然后做菌液pcr。 同一株困用19-T的通用引物P一遍，用我自己目的基因的特異引物P一遍，我挑了50個(gè)菌落，什么都沒(méi)有P出來(lái)，不管是T載體的還是我自己目的基因的，都沒(méi)有P出來(lái)，請(qǐng)問(wèn)大神們是哪里出了問(wèn)題？ 還有一個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教，我看這個(gè)19-T載體的說(shuō)明書說(shuō)什么藍(lán)白菌落的，我怎么沒(méi)有遇到，還有和19-T載體裝在一起的那個(gè)Control Insert是什么，我的體系里沒(méi)有正常嗎？ @youlinglyw 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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6樓2018-08-06 14:12:51
曉風(fēng)晚唱
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2018-08-06 09:09:04
Agonilb
新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
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目的片段會(huì)不會(huì)太大了，PMD19-T也就是2600多，我一般加4μl回收產(chǎn)物產(chǎn)物，連三個(gè)小時(shí)，你可試試過(guò)夜。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2018-08-06 10:12:22
關(guān)Q想畢業(yè)
新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 生物防治
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感謝回復(fù)，我忘了說(shuō)一點(diǎn)，我用氨芐板篩的，每次都長(zhǎng)出很多，但是菌液pcr卻P不出T載體的帶，這是怎么回事？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2018-08-06 10:49:50
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