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王一琇新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助做過鏈霉菌接合轉(zhuǎn)移的同學(xué)們呀 已有1人參與
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我用PKC1139質(zhì)粒進(jìn)行屬間接合轉(zhuǎn)移，三個多月了都沒有結(jié)合子生長不知道是什么問題呀�，F(xiàn)在在進(jìn)行條件摸索和體系建立。 就是孢子過濾洗脫后40℃，45℃，50℃，55℃這幾個條件熱激10分鐘后，28攝氏度震蕩培養(yǎng)2.4.6小時后，與生長到OD600=0.4-0.5的大腸桿菌1:1混合以后涂在含有20毫摩爾氯化鎂的MS培養(yǎng)基上，放置16.18.20.22小時后涂相應(yīng)萘啶酮酸和安普霉素，抗生素濃度都是做過敏感性實驗的應(yīng)該沒問題，但是一直沒有結(jié)合子生長，是我操作有問題還是這個質(zhì)粒在我的菌體里不實用呀做過的小伙伴幫我看一下啦 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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鉛筆的訴說
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- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
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我也花了大半年的時間磨出來的，說說我的經(jīng)驗吧。首先是大腸桿菌的狀態(tài)，供體的狀態(tài)一定要好，不然做不出來的，一般我建議搖到0.6，用5毫升做供體。其次是受體，我之前用孢子一直做不出來，之后用菌絲體做出來了，菌絲體的接合轉(zhuǎn)移比孢子效率高，但你得提前摸好菌絲體在不同時間段對應(yīng)的OD值以及對應(yīng)菌落數(shù)，這個過程比較痛苦，因為要不停的取樣，測生長曲線，（這些得自己查文獻(xiàn)，文獻(xiàn)積累很重要），之后就是供受比，抗生素濃度，覆蓋時間等條件了。記得多看文獻(xiàn)！祝你順利 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2021-10-29 22:16:10
 本帖僅樓主可見 |
2樓2021-08-12 10:50:04
王一琇
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
能幫我分析一下具體是什么問題嗎，感覺已經(jīng)找不到能調(diào)試的條件了3樓2021-08-13 10:42:58
4樓2021-08-28 17:09:16
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