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Melody灬絕仙新蟲 (初入文壇)
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[求助]
反向PCR 測序失敗 已有2人參與
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經(jīng)歷了幾個(gè)月的摸索，終于能夠擴(kuò)增出來?xiàng)l帶了，可是現(xiàn)在卡在了測序這一步，說是雜帶太多。 本人按照一般的反向PCR操作，先使用 EcoR I 和 Hind III 來雙酶切基因組，回收之后 T4 連接酶連接，再次回收，使用Takara公司的PrimeSTAR GXL酶來進(jìn)行反向PCR擴(kuò)增，結(jié)果擴(kuò)得條帶，之前使用PMD18-T載體一直沒有連接上，所以直接送PCR回收產(chǎn)物去測序，可是一直是雜帶太多，無法測序。各位大牛有沒有什么好的建議給小弟。附一張PCR圖 IMG_20170730_180705.jpg |
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Melody灬絕仙
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噢噢，這個(gè)我倒是知道，就是加一個(gè)A尾，我是想問怎么操作呢，將PCR產(chǎn)物切膠回收后，然后怎么加taq？有詳細(xì)點(diǎn)的步驟或是相關(guān)的文獻(xiàn)么？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-08-02 12:47:04
Melody灬絕仙
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2樓2017-08-01 17:20:49
zhouxfd
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3樓2017-08-02 01:00:21
linminchia
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4樓2017-08-02 04:05:31
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