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關(guān)Q想畢業(yè)新蟲 (小有名氣)
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pMD19-T載體連接，怎么都連接不上是怎么回事？求大神 已有6人參與
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我的目的片段36Kb左右，用的酶是TaKaRa的PreMix Taq，連接體系是1μl19-T，1.5μl回收產(chǎn)物，2.5μl水，5μlSolution Ⅰ，16°C，30分鐘，轉(zhuǎn)入DH5α感受態(tài)，然后用氨芐板篩，然后做菌液pcr。 同一株困用19-T的通用引物P一遍，用我自己目的基因的特異引物P一遍，我挑了50個(gè)菌落，什么都沒有P出來，不管是T載體的還是我自己目的基因的，都沒有P出來，請(qǐng)問大神們是哪里出了問題？ 還有一個(gè)問題想請(qǐng)教，我看這個(gè)19-T載體的說明書說什么藍(lán)白菌落的，我怎么沒有遇到，還有和19-T載體裝在一起的那個(gè)Control Insert是什么，我的體系里沒有正常嗎？ @youlinglyw 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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關(guān)Q想畢業(yè)
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感謝回復(fù)，我還有個(gè)相對(duì)小點(diǎn)的目的基因，大概2000左右，這個(gè)可以30分鐘嗎？我還有個(gè)疑惑就是如果沒連接上的話，用氨芐板篩不是應(yīng)該篩不出來嗎？請(qǐng)教 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2018-08-06 15:52:08
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2樓2018-08-06 09:09:04
Agonilb
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目的片段會(huì)不會(huì)太大了，PMD19-T也就是2600多，我一般加4μl回收產(chǎn)物產(chǎn)物，連三個(gè)小時(shí)，你可試試過夜。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2018-08-06 10:12:22
關(guān)Q想畢業(yè)
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4樓2018-08-06 10:49:50
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