做過(guò)透析袋純化DNA的請(qǐng)進(jìn)
我做過(guò)兩次,都回收不到DNA。好像DNA在仍然在膠里沒(méi)跑出來(lái)。。。。。
請(qǐng)問(wèn)做透析袋純化大片段DNA有哪些要注意的?另外有沒(méi)有更好的純化大片段DNA的方法呢?
返回小木蟲(chóng)查看更多
今日熱帖
我做過(guò)兩次,都回收不到DNA。好像DNA在仍然在膠里沒(méi)跑出來(lái)。。。。。
請(qǐng)問(wèn)做透析袋純化大片段DNA有哪些要注意的?另外有沒(méi)有更好的純化大片段DNA的方法呢?
返回小木蟲(chóng)查看更多
京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
Qiagen有相關(guān)的kit!
透析袋回收本身回收效率就比較低的,不知道你回收前的DNA亮度如何,
會(huì)不會(huì)透析袋沒(méi)有扎緊,有沒(méi)有倒轉(zhuǎn)電流通電
回收前亮度還可以。我的情況是DNA仍然在膠里根本沒(méi)有跑動(dòng)。
我覺(jué)得可能是你的DNA里含的雜質(zhì)太多了 有可能是和DNA很相似的大分子雜質(zhì) 纏繞在一起
我之前做過(guò)一系列比較
后來(lái)發(fā)現(xiàn)kit回收的效果好 國(guó)外的提取基因組的kit的那個(gè)silica膜比國(guó)內(nèi)kit的效率高
我當(dāng)時(shí)做的時(shí)候 是用國(guó)內(nèi)的試劑盒 然后拿了一個(gè)國(guó)外kit的濾器 拼一起的
回收效率很好的
但是國(guó)內(nèi)專門(mén)提基因組的kit 回收效果也不行
即使寫(xiě)的是40kb左右 也回收不到片段
如果你沒(méi)有進(jìn)口的kit
還有個(gè)辦法就是用低熔點(diǎn)瓊脂糖
不知道樓主的DNA片段有多大?我以前有做過(guò)電洗脫透析回收,我的目標(biāo)片段是200kb以上的,也有回收到,只不過(guò)回收后跑膠一看卻只有20幾kb。我電洗脫用的是那種普通的直流電泳,后來(lái)有一個(gè)國(guó)外回來(lái)的老師教我們做的時(shí)候,電洗脫人家是用脈沖電泳就沒(méi)這種問(wèn)題。
另外我還用過(guò)低熔點(diǎn)瓊脂糖加瓊脂糖酶消化,最后再用milipore的超濾離心管純化一下就好了。這個(gè)過(guò)程感覺(jué)比較簡(jiǎn)單方便。
雖然最后我還是沒(méi)能成功回收我的目標(biāo)片段,但是也沒(méi)遇到過(guò)樓主說(shuō)的那種問(wèn)題。會(huì)不會(huì)是你的透析帶沒(méi)用緩沖液充滿,扎緊后有氣泡或是膠沒(méi)被沒(méi)過(guò)?還有就是電泳槽里緩沖液不夠,