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梢圓握照庵址椒ǎ?a href="http://www.gaoyang168.com/bbs/url.php?s=aHR0cHM6Ly93d3cudGNtdGNtLmNvbS9PUEMvMy5odG0%3D&_s=1a921d1a7647d748#opennewwindow" target="_blank" rel="nofollow">https://www.tcmtcm.com/OPC/3.htm

蠶豆皮中原花青素提取的工藝研究
     1．2 試藥、試劑 蠶豆皮(粉碎至粒度為4O目，放人廣口瓶備用)；兒茶素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號 110878—200102)。甲醇、乙醇、丙酮、硫酸、香草醛，均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 蠶豆皮中原花青素的提取方法準(zhǔn)確稱取粉碎后的蠶豆皮5．0 g于150 mL圓底燒瓶中，在一定料液比、溶劑濃度、微波功率條件下提取一定時(shí)間，取出過濾，將濾液減壓濃縮，測定原花青素的含量。本文中以百分含量表示，即每100 g蠶豆皮經(jīng)提取得到的原花青素的量。

2．2 原花青素含量的測定 原花青素由不同數(shù)量的兒茶素或表兒茶素結(jié)合而成，最簡單的原花青素是兒茶素與表兒茶素形成的二聚體，此外還有三聚體、四聚體、直至十聚體等等。國際通用的原花青素的分析方法是分光光度法，本文選用香草醛檢測法。 原花青素的顯色機(jī)理與兒茶素相似，在酸性條件下，原花青素組成單元兒茶素的A環(huán)化學(xué)活性較高，其上的羥基可以和香草醛發(fā)生縮合反應(yīng)，在濃酸作用下形成的產(chǎn)物變?yōu)橛猩�的正離子，由于香草醛和多酚類物質(zhì)的一對一的特異結(jié)合，根據(jù)此正碳離子吸光度可測定出原花青素含量。此法具有操作簡單、重現(xiàn)性好、線性范圍寬的優(yōu)點(diǎn)，目前普遍用于測定原花青素的含量。

2．2．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1)溶液配制

兒茶素標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品(65℃真空干燥至恒重)，用50％ 甲醇制成濃度分別為0．04、0．08、0．12、 0．16、0．20 mg／mL的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液；30 g／L香草醛溶液：30 g香草醛溶于1000 mL甲醇中；30％ 硫酸溶液：30 mL 硫酸(95％ ～98％)+70 mL甲醇混合均勻。

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別準(zhǔn)確移取不同濃度的兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液各0．5 mL 于10 mL具塞比色管中，加入2．5 mL 30 s／L香草醛溶液，然后加入2．0 mL 30％硫酸溶液，30％條件下避光反應(yīng)20 rain，以試劑溶液為空白，在500 nm處測定吸光度值，取標(biāo)準(zhǔn)液的濃度和吸光度數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理，回歸方程Y=45．22x+ 0．001，r=0．9995。結(jié)果表明，兒茶素濃度在0．OO4～ O．02mg／mL范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。

2．2．2 原花青素含量測定l j 將濃縮液加50％ 甲醇定容至25mL量瓶中，取上述溶液l mL，用50％ 甲醇定容至25 mL作為樣品溶液；準(zhǔn)確量取0．5 mL樣品溶液，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行測定，加入2．5 mL 30 g／L香草醛溶液，然后加入2．5 mL 30％硫酸溶液，30％條件下避光反應(yīng)20 min，以樣品溶液為空白，即0．5 mL樣品溶液+2．5 mL甲醇+2．0mL 30％ 硫酸溶液，在500 nm 處測定吸光度值。

2．2．3 方法學(xué)考察

1)精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取樣品溶液0．5 mL，于25 mL 量瓶中，重復(fù)測定5次，得RSD為0．92％ 。2)穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一樣品溶液0．5 mL于25 mL量瓶中，照“2．2．2” 項(xiàng)下操作，分別于顯色后l、2、3、4、5h在500 nm處測定吸光度，結(jié)果RSD為1．27％ ，表明供試品溶液中原花青素在測定的5 h內(nèi)可保持穩(wěn)定。

2．2．4 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品5份，分別加入一定量的兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，按樣品原花青素 的提取方法提取后，照“2．2．2”項(xiàng)下操作，在500 nm處測定吸光度并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為96．86％ ，RSD為 1．82％ 。

2．2．5 工藝優(yōu)化方法采用單因素試驗(yàn)法，對提取溶劑、提取溶劑濃度、浸泡時(shí)間、料液比、微波功率等進(jìn)行初步考察，根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果確定正交試驗(yàn)的因素水平，優(yōu)選蠶豆皮中原花青素的最佳微波提取工藝。

3 結(jié)果與分析

3．1 單因素試驗(yàn)

3．1．1 提取溶劑的影響

在相同的微波提取條件下，選用相同濃度的乙醇、甲醇、丙酮和蒸餾水進(jìn)行提取，確定最佳提取溶劑，結(jié)果見圖1。由圖1顯示，采用蒸餾水提取的效果較差，乙醇的提取效果優(yōu)于甲醇、丙酮。甲醇、丙酮均有一定毒性，不適宜應(yīng)用于食品工業(yè)生產(chǎn)。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇乙醇作為最佳的提取溶劑。

3．1．2 溶劑濃度的影響

準(zhǔn)確稱取蠶豆皮5．0 g 5份，分別用30％ 、40％ 、50％ 、 60％ 、70％ 乙醇50mL浸泡1h，微波功率400W 輻射10rain，考察溶劑濃度對提取結(jié)果的影響。

由圖2可見，乙醇濃度達(dá)到50％ 時(shí)，原花青素的提取量最高，再升高乙醇濃度原花青素提取量已略有下降的趨勢，原因是隨著乙醇濃度的增大，使一些脂溶性物質(zhì)的溶出增加。因此確定乙醇濃度50％ 時(shí)為提取效果最佳點(diǎn)。

3．1．3 浸泡時(shí)間的影響

精密稱取蠶豆皮5．0 g 5份于150 mL圓底燒瓶中，各加入50％ 的乙醇溶液50 mL，分別浸泡0．5、1、2、3、4h后微波功率400W 輻射10min，考察浸泡時(shí)間對提取結(jié)果的影響.

由圖3可知，在2 h以前，原花青素提取率隨著浸泡時(shí)間的增長而增大，2 h后隨時(shí)間的增長而略有減少。由于原花青素單元中含有多個(gè)羥基，在長時(shí)間浸泡過程中可能會弓l起其結(jié)構(gòu)的變化，如氧化等。所以考慮到實(shí)驗(yàn)結(jié)果和實(shí)際成本，本文選擇浸泡時(shí)間2 h。

3．1．4 料液比的影響

準(zhǔn)確稱取蠶豆皮5．0g 5份，分別加入50％ 乙醇25、50、 75、100、125mL浸泡2h，微波功率400W 輻射10min，考察料液比對提取結(jié)果的影響。

由圖4可知，當(dāng)料液比達(dá)到1：10后，再增大料液比，提取率趨于穩(wěn)定，即_定比例的溶劑已將有效成份基本溶出完全，且過大的料液比會造成溶劑和能源的浪費(fèi)，并給后面的濃縮帶來困難。所以用50％ 乙醇溶液浸泡時(shí)的最佳料液比為1：10。

3．1．5 微波功率的影響

準(zhǔn)確稱取蠶豆皮5．0g 5份，加入50mL 50％乙醇室溫的條件下浸泡2h，于100、200、400、600和800W 功率下加熱 10min；考察微波功率對提取結(jié)果的影響。

由圖5可知，隨著微波功率的增加，原花青素提取量呈上升再下降趨勢，當(dāng)功率為400W 時(shí)，原花青素提取率最高，曲線達(dá)到最高點(diǎn)。微波功率過高，一些活性成分會被破壞。

3．2 正交實(shí)驗(yàn)

3．2．1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)為優(yōu)選出醇提的最佳工藝條件，在上述單因素試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，用L9(34)正交表，以 原花青素得率為評價(jià)指標(biāo)，對影響原花青素提取效果的因素：微波功率、乙醇濃度、提取時(shí)間等因素進(jìn)行考察，因素水平見表1，試驗(yàn)安排見表2。

3．2．2 正交試驗(yàn)結(jié)果精密稱取蠶豆皮5．Og 9份，按表2 安排提取，按2．2．2項(xiàng)下方法制備樣品溶液并測定原花青素含量，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3。

方差分析表明，因素的重要性依次為C>B>A，微波功率和料液比對原花青素的提取有顯著影響，提取時(shí)間有一定影響。優(yōu)選出的工藝為：A2B2C3，即提取時(shí)間10min，微波功率400W，料液比為1：15。

3．3 提取次數(shù)的確定

分別取5．0g藥粉，在上述已選取的最佳提取條件下，連續(xù)提取5次，結(jié)果如圖6所示。

由圖6可知，隨著提取次數(shù)增加，原花青素的提取量累計(jì)增加。當(dāng)提取次數(shù)大于3時(shí)，曲線趨勢已接近平緩，即原花青素提取量的增加已不明顯。從節(jié)省溶劑和時(shí)間考慮，確定提取次數(shù)為3次。

3．4 驗(yàn)證試驗(yàn)

在選取的最佳提取條件下，對蠶豆皮中原花青素連續(xù)提取3次，測定，得原花青素含量為2．32％(RSD=1．2％ ， = 3)。

4 討論

4．1 本實(shí)驗(yàn)研究了微波法提取蠶豆皮中原花青素的工藝條件，考察了微波輸出功率、溶劑濃度、微波加熱時(shí)間、料液比等重要工藝參數(shù)對原花青素收率的影響，微波法提取蠶豆皮中原花青素的最佳生產(chǎn)工藝條件為：使用50％ 乙醇，按料液比1：15將料液混合，在微波輸出功率400W下，持續(xù)加熱10 min，提取3次，100 g蠶豆皮經(jīng)微波提取可得到 42．2 g粗提物，原花青素得率2．32％。由于粗提物中仍含有一些水溶性大分子的雜質(zhì)如果膠和糖類，還有鞣質(zhì)、有機(jī)酸等，它們會影響到蠶豆皮中原花青素的精制，故今后需要對其中原花青素的分離純化做進(jìn)一步的研究。

4．2 微波法是一種以溶液內(nèi)的分子、離子接受微波輻射獲得能量而迅速升溫的加熱方式，具有快速加熱的優(yōu)點(diǎn)，減少了有效成分在高溫下的受熱時(shí)間，對于熱敏性物質(zhì)的提取是十分有利的，且符合社會的節(jié)能環(huán)保要求。

4．3 本研究為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)蠶豆原花青素提供了技術(shù)支撐，對蠶豆的深層次開發(fā)利用創(chuàng)造了十分有利的條件。

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