如何求酶促反應(yīng)中最大反應(yīng)速度？單位是什么？
問題：對于一個酶促反應(yīng)，通常由米氏方程求米氏常數(shù)和最大反應(yīng)速度以及催化反轉(zhuǎn)常數(shù)，可是有關(guān)數(shù)據(jù)只是底物一系列濃度及所對應(yīng)的吸光度值，請問如何求出米氏常數(shù)？尤其是這個最大反應(yīng)速度的單位不好確定？ 我是不是還缺少條件？文獻(xiàn)都是10^-8 M s^-1,這個如何得出？謝謝各位了。
[ Last edited by xjx11228 on 2010-6-9 at 16:34 ]
返回小木蟲查看更多
今日熱帖
京公網(wǎng)安備 11010802022153號
你的吸光度值【A】不能直接用作求算最大反應(yīng)速度的參數(shù)，而是應(yīng)該轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物濃度【Y】mol/L（這一步用標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以得出），通過短時間t內(nèi)的產(chǎn)物濃度的變化求出初反應(yīng)速度r0,(mol/L.s)。假設(shè)你的底物濃度為【S】，則將底物濃度的倒數(shù)1/[S]作為橫坐標(biāo)，將反應(yīng)初速度的倒數(shù)1/r0作為縱坐標(biāo)作圖，做出來的圖上面就有最大反應(yīng)速度和米氏常數(shù)這類的參數(shù)了，單位就是mol/(L.s)
非常謝謝你的回答。方法是對的�？墒怯幸稽c(diǎn)還不明白。由A轉(zhuǎn)換為濃度時由標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算產(chǎn)物濃度。關(guān)鍵是這個產(chǎn)物濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何制得？還是用同一組數(shù)據(jù)?
如HRP對TMB底物的米氏常數(shù)和最大反應(yīng)速度：
TMB濃度 Absorbance
1 0.034
2 .....
3 .....
4
5
6
產(chǎn)物的濃度如何得到？測得A是底物氧化后產(chǎn)物的，是否由化學(xué)反應(yīng)方程式得出。這樣一來吸光度數(shù)值就沒有用了。
是否有其它轉(zhuǎn)換方法呢？用吸光度肯定不對，否則計算單位不對
，
求助中。。。。。。。。。
所謂的標(biāo)準(zhǔn)曲線就是你的產(chǎn)物Y的濃度在你那臺分光光度計上的吸光值A(chǔ)之間的對應(yīng)關(guān)系，其實(shí)跟你的底物濃度沒有關(guān)系。也就是你配置一定濃度的產(chǎn)物（這個需要用純品，分析純的即可），測定每個濃度下的吸光值，做一條直線，就是你的標(biāo)準(zhǔn)曲線，就是說產(chǎn)物濃度Y和吸光值A(chǔ)之間形成了一種關(guān)系：A=a+bY，這樣你用你的底物反應(yīng)完之后的反應(yīng)液測得的吸光度，實(shí)際上對應(yīng)著你的反應(yīng)液里有多少產(chǎn)物，根據(jù)你標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程計算就出來了，這樣吸光值不就有用了嗎。總結(jié)來說，標(biāo)準(zhǔn)曲線就是建立一個吸光值與產(chǎn)物濃度的關(guān)系，明白了嗎？
這種標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法是放之四海而皆準(zhǔn)的，多看看書上的介紹你就可以發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的標(biāo)準(zhǔn)曲線都是建立一種目標(biāo)產(chǎn)物濃度與檢測值之間的關(guān)系，從而能根據(jù)實(shí)際樣品的檢測值來計算目標(biāo)產(chǎn)物濃度，呵呵
補(bǔ)充一點(diǎn)，你只需要測定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線（一系列濃度的產(chǎn)物濃度和吸光值的關(guān)系）A=a+bY
然后根據(jù)你舉的例子中的吸光值計算出對應(yīng)的一系列產(chǎn)物濃度，即可得到：
TMB濃度 產(chǎn)物濃度
1 Y1
2 Y2
……
如果你以TMB為底物的時間夠短的話（設(shè)為t），則你需要求算米氏常數(shù)的反應(yīng)初速度為Y/t, 單位mol/(L.s)，對應(yīng)不同的底物濃度，就對應(yīng)有一定的反應(yīng)初速度，則：
TMB R
1 r1
2 r2
……
再往下你就會了吧
哦，我懂了，如果我沒有底物氧化產(chǎn)物的純品，就無法得出最大反應(yīng)速度了。如TMB，還要求做聯(lián)苯醌的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，從而求對應(yīng)的反應(yīng)速度。可是這個聯(lián)苯醌的純品有沒有賣的呢？
如果有名字的話，應(yīng)該是有賣的，呵呵，你可以看看相關(guān)文獻(xiàn)，祝你成功