各位蟲友: 請問用瓊脂糖怎么固定懸浮細(xì)胞?或有其他更好的固定方法。 返回小木蟲查看更多
目前人工固定的方法主要有3 種:①瓊脂糖包埋法,即把低熔點的瓊脂糖熔化,冷卻到一定溫度后將制備的細(xì)胞懸浮液混合于瓊脂糖中,并使細(xì)胞體的一半埋在瓊脂糖中而固定,一半暴露在瓊脂糖的表面以便于進(jìn)行顯微注射;②多聚-L-賴氨酸粘連法,即先用多聚-L-賴氨酸處理玻片表面,由于多聚-L-賴氨酸對細(xì)胞有粘連作用。因此當(dāng)分離的細(xì)胞或原生質(zhì)體與玻片接觸時,就可被固定在玻片上;③吸管支持法,即用一固定的毛細(xì)管將原生質(zhì)體或細(xì)胞吸附在管口,起到固定作用。并且吸管可以旋轉(zhuǎn)或移動位置,使操作者選擇最佳位置進(jìn)行注射。顯微注射用的微針通常用拉針機制備,針尖直徑以0.5 μm左右為宜。一次注入的DNA量約為10-9 mol,
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目前人工固定的方法主要有3 種:①瓊脂糖包埋法,即把低熔點的瓊脂糖熔化,冷卻到一定溫度后將制備的細(xì)胞懸浮液混合于瓊脂糖中,并使細(xì)胞體的一半埋在瓊脂糖中而固定,一半暴露在瓊脂糖的表面以便于進(jìn)行顯微注射;②多聚-L-賴氨酸粘連法,即先用多聚-L-賴氨酸處理玻片表面,由于多聚-L-賴氨酸對細(xì)胞有粘連作用。因此當(dāng)分離的細(xì)胞或原生質(zhì)體與玻片接觸時,就可被固定在玻片上;③吸管支持法,即用一固定的毛細(xì)管將原生質(zhì)體或細(xì)胞吸附在管口,起到固定作用。并且吸管可以旋轉(zhuǎn)或移動位置,使操作者選擇最佳位置進(jìn)行注射。顯微注射用的微針通常用拉針機制備,針尖直徑以0.5 μm左右為宜。一次注入的DNA量約為10-9 mol,