【求助】求教基因克隆中的引物設(shè)計(jì)問題【有效期至2010年11月18日】
從NCBI上獲得一物種X基因序列，要根據(jù)該基因序列克隆另一物種的X基因全長(zhǎng)序列，應(yīng)該怎么設(shè)計(jì)引物？
需不需要比對(duì)根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)？還是直接在編碼區(qū)設(shè)？
要是做SNPs的分析，特異性引物又該怎么設(shè)？
問的有點(diǎn)多且亂，望知道的大蝦不吝賜教，謝謝！
附注：引物的設(shè)計(jì)原則之類的不用在回答了，只需要一個(gè)盡可能詳細(xì)的過程和方法，如果好用，全部金幣奉上！
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
可以比對(duì)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，然后做3·，5·race
給你發(fā)篇相關(guān)的文獻(xiàn)吧，這篇是在很有影響力的雜志--development上發(fā)表的，希望對(duì)你有幫助，https://www.namipan.com/d/Neverl ... 74a0c0953081cc21500
因?yàn)槲锓N不一樣所以根據(jù)一個(gè)物種的序列設(shè)計(jì)全長(zhǎng)引物去擴(kuò)另一個(gè)物種的話很有可能擴(kuò)不出，畢竟物種之間序列存在差異是很正常的。不過可以試一下，直接設(shè)計(jì)全長(zhǎng)引物。不行的話可以盡可能多下載一些相關(guān)序列做同源比較設(shè)計(jì)保守區(qū)引物或兼并引物進(jìn)行擴(kuò)增，再用Race或染色體步移方法擴(kuò)增全長(zhǎng)。
SNPs的分析，特異性引物的設(shè)計(jì)就要把類似物種的序列下載后同源分析找出保守區(qū)進(jìn)行設(shè)計(jì)了。
感謝各位蟲蟲的支持，可惜還是沒能給我詳盡的答案！就此結(jié)貼！
你給的鏈接有問題哎
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