求助,SDS-PAGE電泳圖(Marker最后一個(gè)條帶跑不出,膠底部很奇怪)
12%分離膠110V,4%濃縮膠70V,Marker共10條,但是最后一條基本看不見(jiàn),膠底部很奇怪不明原因,求高手指點(diǎn)!~~

2012.12.6.jpg
返回小木蟲(chóng)查看更多
今日熱帖
12%分離膠110V,4%濃縮膠70V,Marker共10條,但是最后一條基本看不見(jiàn),膠底部很奇怪不明原因,求高手指點(diǎn)!~~

2012.12.6.jpg
返回小木蟲(chóng)查看更多
京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
提的是對(duì)蝦肌肉全蛋白,用裂解液提取,但是底部不明白為什么會(huì)出現(xiàn)這種狀況,是蛋白樣品的問(wèn)題還是電泳的問(wèn)題,求高手指點(diǎn)指點(diǎn)!~
有沒(méi)有做重復(fù)試驗(yàn)?zāi)?若重?fù)還是如此,可能是因?yàn)榱呀庖旱膒h值與電極緩沖液差別太大,離子有些漂移。。。。
有做,幾次都是這樣,底部都出現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題,而且Marker的最后一個(gè)條帶總也跑不出,如何解決呢?
基本同意3樓的想法,不知道你的裂解液的成分是什么,建議可以用pH近中性的緩沖液(TE或Tris)換一下你的樣品的緩沖體系,在跑一次。
8M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,1%DTT,1%IPG-Buffer。剛接觸這方面的知識(shí),不是很了解,能詳細(xì)說(shuō)說(shuō)嗎,如何換,是替換成分中的試劑?替換哪種?謝謝指導(dǎo)!
8M尿素會(huì)導(dǎo)致樣品鹽濃度過(guò)高,換緩沖液,并不是指替換裂解液中的某種成分,而是先正常進(jìn)行樣品裂解,再用溫和的緩沖體系替換樣品溶液中的裂解液成分(即除鹽),如果你的實(shí)驗(yàn)室有超濾離心管,工作原理非常簡(jiǎn)單,試試吧
,
的確離子濃度過(guò)高