PCR之前能擴出來，后來再做卻擴不出來，求高手指教�。。�
我自己設(shè)計的一對引物，同樣的反應(yīng)體系，同樣的PCR循環(huán)參數(shù)，先前做幾次都能擴出來，后來再做卻擴不出來了，不管換什么樣的條件，總是什么條帶都沒有。我只有13個金幣，都拿出來了，跪求各位PCR高手指教啊，謝謝了�。�！
附引物序列：上：GCATCGCCAACTTCTTCC
下：CCCGCTGTTCTTCTTGC
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補充一下，我的引物放了已經(jīng)有差不多半年了，是寶生物合成的，我再想問下，這么長時間引物會不會出問題了？？？？
你的引物如果正確的存放在-20度，半年的時間應(yīng)該不會有問題的.
我之前跟你遇到的問題一樣，換了另一種聚合酶，然后就得到了目的條帶，建議你換一種聚合酶試試.
再請問下，引物一般最多能反復(fù)凍融幾次？我的引物已經(jīng)被我凍融過4-5次了，會降解嗎？
引物反復(fù)凍融肯定是不好的。建議您下次貯存引物時還是應(yīng)該配制好100uM的母液以后分裝幾支，避免反復(fù)凍融同一支。如果還有母液就重新稀釋吧。沒有母液的話倒不如重新訂引物了，幾十塊錢，3天左右。應(yīng)該比糾結(jié)于此合算。還有換一支聚合酶也是可行的，出問題的不一定就是引物
，
樓主做實驗要做對照啊 這樣很容易找出是什么原因（模版，引物還是體系都能找出來）
聚合酶我已經(jīng)重訂了一個公司的，今天在試，謝謝了
我的不需要對照，因為是自己設(shè)計的引物，模板也是已知的陽性，能擴出來就擴出來，不能也就不能了，有無對照并無關(guān)系