我設(shè)計了個FRET實驗觀察兩個蛋白相互作用,一個用Fluorescein(donor)標(biāo)記了,另一個用TAMRA(acceptor)標(biāo)記.
在誘導(dǎo)相互作用以后,我可以明顯地看到fluorescein(donor)熒光強度下降了50%-70%, 但是TAMRA(acceptor)的熒光根本觀察不到
后來我直接用acceptor的激發(fā)波長激發(fā)acceptor,發(fā)現(xiàn)acceptor的熒光亮度僅僅是donor熒光亮度的1/8到1/10,估計是熒光轉(zhuǎn)化效率太低,兩個放在一起就被donor的熒光蓋住了,(donor在acceptor的發(fā)射波長范圍也有很弱的熒光)
有沒有什么辦法能夠降低donor的熒光效率,或者證明FRET確實發(fā)生了?因為我要是把這樣的結(jié)果給審稿人,審稿人看不到acceptor的變化,肯定不相信我的數(shù)據(jù)啊
我想能不能把TAMRA(acceptor)給光漂白了,嘗試觀察Fluorescein(donor)的重新上升?有親這么做過嗎? 返回小木蟲查看更多