如何科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)仳?yàn)證一株啤酒酵母的某個(gè)基因是否為多拷貝基因?
本人通過同源重組方法過表達(dá)了一個(gè)基因,構(gòu)建了一株啤酒酵母。但是在PCR驗(yàn)證全長(zhǎng)的時(shí)候只有一條帶,這樣就不能說明過表達(dá)的基因是多拷貝基因了。求助有什么方法能驗(yàn)證基因?
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本人通過同源重組方法過表達(dá)了一個(gè)基因,構(gòu)建了一株啤酒酵母。但是在PCR驗(yàn)證全長(zhǎng)的時(shí)候只有一條帶,這樣就不能說明過表達(dá)的基因是多拷貝基因了。求助有什么方法能驗(yàn)證基因?
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
你應(yīng)該是同源重組到基因組上了吧?哪還有多拷貝和低拷貝之分嗎?他又游離不出來~
是同源重組上去的,我用的菌是多倍體,所以我的目的基因有可能是多拷貝基因,目前我只知道我這株菌是非單倍體,所以要具體驗(yàn)證基因的拷貝數(shù),
好吧,不太懂,祝好運(yùn)
不過也謝謝你
你驗(yàn)證的基因是同一個(gè),普通pcr條帶應(yīng)該一樣大,本該就是一條啊。
RT-PCR可以定量檢測(cè)基因的表達(dá)量,但是不知道菌株是幾倍體,不知到怎么選擇內(nèi)參。
是同源重組到基因組上了,可是我用的菌是多倍體,也就是說,目的基因可能是多拷貝的,假如是敲除目的基因的話,也就是說有可能只敲除這個(gè)基因的一個(gè)拷貝,但是仍然存在該目的基因。
如果敲除的是單倍體中的基因,P全長(zhǎng)驗(yàn)證的時(shí)候就會(huì)沒有該基因的目的條帶,但是如果敲除多倍體基因的話,驗(yàn)證的時(shí)候會(huì)有該目的基因條帶,也會(huì)有敲除后的條帶
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