pCRISPomyces-2 敲除質(zhì)粒構(gòu)建鏈霉菌
利用pCRISPomyces-2 敲除單個(gè)基因，2kb同源臂的設(shè)置，是在spacer上下游各設(shè)置1kb的同源臂，想問下是緊挨著spacer+PAM上下設(shè)置嗎，如果這樣設(shè)置是不是就是只敲除了27bp,還是也可以不緊挨著設(shè)置？
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可以不緊挨著設(shè)計(jì)，鏈霉菌基因敲除不好做啊
請教下，不挨著空多大都可以嗎？有沒有大小要求，上下游幾kb可以
哎，這位兄臺也是做這個(gè)嘛?我要耗死在這個(gè)上面了。實(shí)驗(yàn)室人沒做過 我一個(gè)小碩單獨(dú)建體系 我太難了 快畢業(yè)了 一個(gè)突變體篩不到
太難了！
樓主做出來了嘛？我連上下游各1KB的片段P都P不出來 ，后來就沒設(shè)同源臂去敲單基因了，到現(xiàn)在沒有拿到突變體，不知道能不能畢業(yè) ！慌得一批
咱們做鏈霉菌的可以交流下，或者建個(gè)群我也要耗死了
，
請問各位大神，后來做了鏈霉菌基因敲除嗎，想咨詢方法，感激不盡