救命�。〈笃我飻U(kuò)增（參考megawhop的方法）
一開(kāi)始可以p出完整的質(zhì)粒，但是膠孔處有很亮的條帶跑不下來(lái)并且拖帶嚴(yán)重。結(jié)果現(xiàn)在不管怎么試都p出目的條帶了，要不全是拖帶，要不只能看到p出大片段引物的條帶
暈，有沒(méi)有同學(xué)可以交流交流
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你可以試著分段P，然后拿overlap連起來(lái)
做引物的大片段沒(méi)有問(wèn)題的話，換一管模板質(zhì)粒試試吧，另外質(zhì)粒濃度要準(zhǔn)確，我們一般不超過(guò)30ng，加多了DpnI不好切。
不知道你的片段有多大，質(zhì)粒當(dāng)模板的話，至少得稀釋個(gè)幾百幾千倍。
我也是，質(zhì)粒之前也是能擴(kuò)增出來(lái)，現(xiàn)在同樣的條件又不能了。
第一種情況，留在膠孔不出來(lái)，很可能是交聯(lián)在一起了，在跑膠加孔之前，95℃ 5min加熱變性，緩慢降溫，然后后進(jìn)行跑膠即可。
第二種情況，后面擴(kuò)增不出來(lái)，考慮是否DNA分解，重新提取質(zhì)粒。加入質(zhì)粒之前測(cè)一下濃度，質(zhì)粒的拷貝數(shù)一般不宜過(guò)高，模板過(guò)高也會(huì)抑制反應(yīng)。 此外，長(zhǎng)片段擴(kuò)增可以嘗試其他酶試試，比如takara GXL，