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細胞水平上基因編輯

作者 喲呵——
來源: 小木蟲 200 4 舉報帖子
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請問有做過Cas9 RNP復合物通過脂質體方式轉染到昆蟲細胞中的大佬么，通過該種轉染方式后提取細胞基因組然后克隆送測序檢測不到編輯效果是怎么回事兒呀？？？ 返回小木蟲查看更多

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  • 精華評論
  •
    genemail

    首先Cas9轉染成功了嗎？

  •
    喲呵——

    引用回帖:
    2樓: Originally posted by genemail at 2020-07-16 23:10:45
    首先Cas9轉染成功了嗎？

    如何確定是否轉染成功了呀，有的文獻里面說有些基因，通過該種方式不能夠進行基因編輯，我在想通過脂質體轉染，是否能夠將Cas9蛋白導入到細胞核里面去發(fā)揮編輯效果啊，

  •
    喲呵——

    引用回帖:
    4樓: Originally posted by junjieshao at 2020-07-18 05:18:49
    你是通過瞬時轉染去看基因編輯成功了還是看cas9有沒有表達？
    如果要做瞬時轉染編輯基因，一般采用帶熒光標簽的crispr系統(tǒng)，可以通過流式細胞儀篩選。
    如果要做穩(wěn)定細胞系（基因編輯），一般采用三抗生素系統(tǒng)，效果 ...

    我只是想在細胞水平上驗證通過轉染Cas9蛋白和gRNA的復合物是否能夠對該基因成功進行編輯，也相當于是看設計的gRNA的編輯效果吧
    ，

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