基因敲除可能脫靶了,求助
請(qǐng)問哪位同仁做過基因敲除的?我做了幾次都沒有成功。很奇怪,菌株是獲得了篩選標(biāo)記-抗生素的抗性,但是通過PCR驗(yàn)證,PCR產(chǎn)物大小與出發(fā)菌株吻合。篩選了幾十菌落,都是這樣。有沒有同仁給點(diǎn)意見和建議的。多了好久了。@biostar2009@飛約瘋?cè)嗽?/u>@wizardfan@youlinglyw
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請(qǐng)問哪位同仁做過基因敲除的?我做了幾次都沒有成功。很奇怪,菌株是獲得了篩選標(biāo)記-抗生素的抗性,但是通過PCR驗(yàn)證,PCR產(chǎn)物大小與出發(fā)菌株吻合。篩選了幾十菌落,都是這樣。有沒有同仁給點(diǎn)意見和建議的。多了好久了。@biostar2009@飛約瘋?cè)嗽?/u>@wizardfan@youlinglyw
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補(bǔ)充,兩側(cè)的同源臂都是400-500bp。
我用Crisper cas9做KO,可以拿到陽性克隆
樓主你最后怎么解決的啊
我也是能在抗性板上長(zhǎng),但是pcr驗(yàn)證不對(duì)
送出去做,投降了
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